179463. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dexozi-narazin antibiotikum-komplex előállítására
21 179463 22 9. táblázat A két Frakció Térfogat Oldószer antibiotikum aránya Hozam (mg): 1. 3,01 benzol 100% 24 2. 2,01 benzol : etilacetát 9 : 1 20 3. 600 ml benzol : etilacetát 4 : 1 85 4. 300 ml benzol : etilacetát 4 :1 5 5. 300 ml benzol : etilacetát 4 : 1 7 6. 900 ml benzol : etilacetát 4 : 1 18 7. 2,01 benzol : etilacetát 4 : 1 22 8. 300 ml benzol : etilacetát 4 : 1 7 9. 450 ml benzol : etilacetát 4 :1 22 10. 450 ml benzol : etilacetát 4 :1 9 11. 1,21 benzol : etilacetát 4 :1 7 12. 1,21 benzol :’etijacetát 4 : 1 5 13. 1,01 benzol : etilacetát 4 :1 12 14. 1,01 benzol : etilacetát 3 : 1 14 15. 1,51 benzol : etilacetát 3 : 1 28 16. 1,5 1 benzol : etilacetát 3 : 1 100 17. 450 ml benzol : etilacetát 3 : 1 26 18. 900 ml benzol : etilacetát 3 : 1 70 19. 1,01 benzol : etilacetát 3 :1 54 20. 300 ml etilacetát 100% 12 21. 150 ml etilacetát 100% 180 22. 150 ml etilacetát 100% 125 23. 450 ml etilacetát 100% 170 24. 300 ml metanol 100% 40 25. 450 ml metanol 100% 1100 XA terméket nátriumszulfát feletti szárítás, szűrés és a szűrlet csökkentett nyomáson való szárazrapárolása után kaptuk. per-Cel szűrési segédanyagot adunk hozzá, majd szűrjük a tenyészetet. Elkülönítjük a micéliumot, majd 2 x 45 liter acetonnal extraháljuk, amely literenként 50 g nátriumhidrogénkarbonátot tartalmaz. Egyesítjük az acetonos extraktumokat, és csökkentett nyomáson töményítjük, mindaddig, míg 10 liter vizes oldatot kapunk. 5N hidrogénklorid oldattal 8,0-ra állítjuk be ennek az oldatnak a pH-ját, majd háromszor fél térfogat diklórmetánnal extraháljuk. Egyesítjük a diklórmetános extraktumokat, majd csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradékként olajos terméket kapunk. Ezt hexán, metanol és víz 10:7:1 arányú elegy ének 500 ml térfogatú felső fázisában oldjuk. A felső fázisból kapott oldatot 6 x 300 ml alsó fázissal extraháljuk. Ezeket az extraktumokat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot dioxánban oldjuk, az oldatot liofilizáljuk, amikor 19,4g dezoxi-narazin komplexet kapunk. Több, hasonló feldolgozásból kapott mintát egyesítünk, majd 40 g ilyen egyesített terméket toluolban oldunk. Az oldatot szilikagél oszlopra rétegezzük folyadékkromatográfiában (Waters Associates Prep. LC/System 500). Az oszlopot toluol és etilacetát 9 : 1 arányú elegyével eluáljuk, az eluálás sebessége 250 ml/perc. 250 ml-es térfogatú frakciókat gyűjtünk. A frakciók antibiotikum-tartalmát vékonyrétegkromatográfiával határozzuk meg. A 37—52. frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk, ami után a desztillációs maradékot dioxánban oldjuk. Az oldatot fagyasztva szárítva 7,8 g tiszta, 20-dezoxi- 40 -narazinban dús terméket kapunk. Ezt a fentiek szerint eljárva Waters Prep. LC/System 500 készülékben újra kromatografáljuk. Toluol és etilacetát 9 : 1 arányú elegyével eluálva 50 frakciót különítünk el, majd 100%-os etilacetáttal folytatjuk az eluálást. Az 45 51—53. frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot dioxánban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, ami után 1,12 g 20-dezoxi-narazin nátriumsót kapunk. 50 5. példa 55 A 20-dezoxi-narazin szabad sav előállítása 200 mg 20-dezoxi-narazin nátriumsót 10 ml etilacetátban oldunk. Az oldatot 0,1 N hidrogénklorid oldat 10ml-ével mossuk, majd a mosást 2x5 ml 60 vízzel megismételjük. A szerves oldószeres fázist elkü lönítjük, és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk A desztillációs maradékot dioxánban oldjuk, és fa gyasztva szárítjuk, ami után 139,6 mg fehér színű szilárd halmazállapotú terméket kapunk. Ez a 20-dez 65 oxi-narazin szabad sav. II
