179435. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban és eljárás az ehhez megfelelő színképzők előállítására
11 179435 12-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-0-acetil-L-tirozii]-brómfenolkék/, színtelen, amorf por, amely 0,6 mól etil-acetátot tartalmaz. [«ló® = —35,3° (c= 1, etil-acetát). A szintézisnél melléktermékként még az alábbi vegyület válik ki: Di[N-(benziloxi-karbonil)-N-(etoxi-karbonil)-Q-acfítil-L-tirozil ]-3,5,3”,5 ”-te trabróm-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-N-(etoxi-karbonil)-0-acetil-L-tirozilj-brómfenolkék/, színtelen, amorf por, [a]^0 = -19,5° (c= 1, etil-acetát). d) Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil]-4,5,6,7,3’,5’,3”,5”-oktabróm-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil]-tetrabrómfenolkék/, színtelen amorf por, [a]p° = —28,7° (c = 1, metanol). 7. példa Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil]-3’,5\3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil ]-brómfenolkék/. 1. oldat: Az egylépéses módszer szerint a savklorid előállításához 1,18 g (4 mmól) N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanint feloldunk 10 ml vízmentes dimetil-formamidban, és -30 °C-ra lehűtjük. Utána keverés és hűtés közben hozzápipettázunk 0,32 ml (4,4 mmól) tionil-kloridot, és a reakcióelegyet nedvesség kizárása mellett 30 percig a hűtőfürdőben (-30 °C) hagyjuk. 2. oldat: 1,34 g (2 mmól) brómfenolkéket feloldunk 10 ml vízmentes dimetil-formamidban, és —10 °C és —20 °C közé hűtjük. Reakció: A 2. oldatot hozzáadjuk az 1. oldathoz, majd hozzáadunk májj 1 ml piridint a reakcióelegyhez, és 2 órán át -10 X és -20 °C között majd 2 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. Ugyanilyen menynyiségű frissen készített savkloridot (1. oldat) valamint piridint összesen még háromszor adunk hozzá, mikor is mindenkor betartjuk a fenti reakciókörülményeket. Feldolgozáskor a reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk és utána a 6. példában megadottak szerint kezeljük tovább. így 2,67 g amorf nyersterméket kapunk, amelyet oszlopkromatográfiásan tisztítunk szilikagélen heptán : etil-acetát (1 : 2) eleggyel eluálva. így 1,4 g (57%) di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftaleint kapunk színtelen, amorf porként, amely 0,6 mól etil-acetátot tartalmaz: [a]p° = -5,9° (c = 1, etil-acetát). Hasonló módon kapjuk a következő vegyületet is: Di[Na-(benziloxi-karbonil)-NCJ-nitro-L-arginil]-3 ’,5 ’,3 ”,5 ’’-tetrabróm-fenolszulfonftaíein /=di[Na-(benziloxi-karbonil)-NCJ-nitro-L-arginil]-brómfenolkék/, színtelen, amorf por, amely 0,6 mól kloroformot tartalmaz, [a]p° = -12,0° (c = 1, ecetsav). Szabadalmi igénypontok: 1. Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban, amely színképzővel, megfelelő pufferanyaggal, valamint járulékos, szokásosan alkalmazott segédanyagokkal impregnált szívóképes hordozóból áll, azzal jellemezve, hogy színképzőként I általános képletű szulfonftalein-észtert — a képletben R, jelentése valamely, adott esetben halogénatommal vagy rövidszénláncú alkoxicsoporttal szubsztituált 1-5 szénatomos alifás karbonsav-, benzoesav- vagy naftoesavgyök, benzoil-oxi-karbonil- vagy rövidszénláncú alkoxi-karbonil-nitrogén-védőcsoporttal rendelkező aminosav- vagy 2-4 aminosavból álló peptid-gyök, emellett az aminosav- vagy pcptidgyök adott esetben nitro- vagy O-acetil-csoporttal szubsztituált, R2 jelentése halogénatom vagy valamely rövidszénláncú alkilcsoport, R3 és R4 jelentése azonos vagy eltérő, éspedig hidrogénatom vagy halogénatom — tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti diagnosztikai szer kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a hordozó járulékos segédanyagként valamilyen nedvesítőszert tartalmaz. 3. Eljárás az 1. igénypont szerinti leukociták kimutatására szolgáló diagnosztikai eszköz előállítására, szívóképes hordozóinak színképzők, megfelelő pufferanyagok, valamint járulékos szokásosan alkalmazott segédanyagok oldatával végzett impregnálása útján, azzal jellemezve, hogy színképzőként egy vagy több I általános-képletű szulfonftaleinésztert - a képletben Rí jelentése valamely, adott esetben halogénatommal vagy rövidszénláncú alkoxicsoporttal szubsztituált 1—5 szénatomos alifás karbonsav-, benzoesav- vagy naftoesavgyök, berizoil-oxi-karbonil- vagy rövidszénláncú alkoxi-karbonil-nitrogén-védőcsoporttal rendelkező aminosav- vagy 2—4 aminosavból álló peptid-gyök, emellett az aminosav- vagy peptidgyök adott esetben nitro- vagy O-acetil-csoporttal szubsztituált, R2 jelentése halogénatom vagy valamely rövidszénláncú alkilcsoport, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
