179146. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiológiai úton, micromonospóra rosea törzs fermentációjával
179.146 nyiségü metanolba csurgatjuk. További 30 porc keverés, majd 15 pero ülepités után a kivált sziszomioin-szulfátot dekántálva szűrjük. A kiszűrt anyagot öt szűr egymás után 100-100 ml metanollal felszuszpendálva mossuk, majd 100 ml aoetozmal szuszpandáiJuk, végül 50 ml aoetonnal fedjük. 30 mbar nyomáson kO C°-on foszforpentoxid felett szárítjuk. 22 g 580 mog/mg aktivitású sziszomicin-szulfátot kapunk. A termék fizikai Jellemzői megegyeznek az 5* példában kapott termék jellemzőivel. 9. példa Mioromonospora rosea /MNG 182/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú, 600 ug/ml biológiai aktivitású fermentlé pH- ját 25 í-os ananónium-hidroxid oldattal keverés közben 10-re állítjuk be. A lúgos fermentlét 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt micéliumot 3,5 liter vízzel mossuk, majd a kapott 11 liter egyesített szürlethez addig adagolunk ammónium-oxalátot, amíg a kalciumionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután a lúgos oldatot 15 peroig keverjük, majd pH-ját 7-re állítjuk be 5 n kénsav-oldattal. A kivált csapadékot leszűrjük, majd 500 ml vízzel mossuk. így 11,5 liter 3**5 ,ug/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt 180 ml semLegesre mosott ammonium-formájú VARION KCO ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon folyatjuk át 1000 ml/6ra sebességgel. A megkötés befejeztével a gyantaágyat 600 ml ionmentes vízzel mossuk. A leoldást **50 ml 2 n ammoniumhidroxid-oldattál végezzük 200 ml/óra sebességgel. A sziszomioint tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az igy kapott mintegy 200 ml oldatot vákuumban, f>o- 60 C°-on 20 ml térfogatra bepároljuk. Ezután az oldat pH-ját 5 n kénsav-oldattal 7,5-re állítjuk be és az oldathoz 165 mg aktivszenet adunk. Az elegyet 15 percen át keverjük, majd leszűrjük. A szürletet 75 “1 ammónium-formájú Amberlite GG-50-I gyantát tartalmazó oszlopra visszük fel. A gyantaoszlopot 500 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 150 ml/óra sebességgel összesen 1500 ml 0,1 n ammóniumhidroxid oldattal a kisérő szennyező bioszintézis termékeket leoldjuk. Ezután 600 ml 0,2 n ammóniumhidroxid oldattal leoldjuk a sziszomioint, ugyancsak 150 ml/ óra sebességgel. A csak sziszomioint tartalmazó frakciókat egyesitjük, és vákuumban 50-60 C°-on bepároljuk. így 3,0 g szisz omioin-bázist tartalmazó oldatot kapunk. Az oldatot 0,**5 g aktiv szénnel 30 peroig keverve derítjük, majd Seitz-lapon szűrjük. Ezután keverés közben kis részletekben 3»6 g frissen készült Imidazol-szulfát sót adagolunk az oldathoz. Az Imidazol -szulfát teljes oldódása után az oldat pH-Ja 7,75. Az oldathoz 0,3 g aktiv szenet adunk és az elegyet 30 percen át keverjük, majd Seitz-lapon szűrjük. A kiszűrt szenet 5 ml vízzel mossuk és a mosóvizet a szürlettel egyesítjük. A mosóvízzel egyesített szürletet .keverés közben tízszeres mennyiségű metanolba csurgatjuk. További 30 perc keverés, majd 15 perc ülepités után a kivált sziszomicin-szulfátot dekantálva szűrjük. A kiszűrt anyagot ötször egymás után 25-25 ml metanollal felszuszpendálva mossuk, majd 25 ml aoetonnal szuszpendáljuk, végül 15 ml aoetonnal fedjük. 30 mbar nyomáson **0 C -on foszforpentoxid felett szárítjuk. így **,** g 580 mcg/mg aktivitású sziszomioin-szulfátot kapunk. A termék fizikai jellemzői megegyeznek az 5. példa szerint kapott termék jellemzőivel. 10
