179146. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiológiai úton, micromonospóra rosea törzs fermentációjával

179.140

Az antibiotikum termelés a fermentáció 35-4o órájában indul meg, s a maximális értéket a 110-120 órában éri el. A fermentáció befejezésének időpontját Klebsiella pneumoniae-val végzett gyors turbidimetriás értékméréssel határozzuk meg.

A fermentlé összes antibiotikum tartalma sziszomicin bázis standard-re vonatkoztatva 650 E/ml/agardiffúziós módszerrel meghatározva/.

4. példa

Az 1. példában leirt módon készült 100 liter inokulum tenyészettel 1 m3 következő összetételű táptalajt oltjuk:

szójaliszt

kazein-hidrolizátum

4o g

/száraz súly/

lo g

kukoricakeményitő

5o g

glükóz

5 S

kai0iumkarbonát

4 g

s

magnéziumszulfát

2 g

vasszulfát /FeS0^.7H20/

0,2 g

kobaltnitrá t

0,8 mg

e

pálmaolaj

2 g

osapviz looo ml-re.

A kazein hidrolízisét parlereatinnal végezzük. A táptalaj pH-ját sterilezés előtt 8,0-ra állítjuk be. A sterilezést keverés közben 121 C°-on 1,3-1,4 atmoszféra nyomáson végezzük egy órán keresztül. A tenyésztést saválló acél fermentorban végezzük. A keverés fordulatszáma 400/perc, a levegőztetés 1 térfogat levegő/ 1 térfogat fermentlé percenként. Habzásgátlóként pálmaolajat használtaik.

Az antibiotikum termelés a fermentáció 35-4o órájában indul meg, s a maximális értéket a 110-120. órában éri el. A fermentáció befejezésének időpontját Klebsiella pneumonisae-vel végzett gyors turbidimetriás értékméréssel határozzuk meg.

A fermentlé összes antibiotikum tartalma sziszomicin standardre vonatkoztatva 680 E/ml/agardlffuziós módszerrel meghatározva/.

A fermentáció befejezése után a fermentlévől ismert módon eljárva 35o g tiszta sziszomicin bázist kapunk, mely kötött vizet is tartalmaz.

O.p. : 198-201 C°> /<*/ = +l88°/c=0,3 viz/j IR spektrum /KBr/:^ OH, NH 3170-3360, $ CH=C0C 1690, y COC 1060 om“1.

PMR-spektrum /D20/: <fl,20 /Me**4", s, 3H/<T2,50 /Üe-N-3", s, 3H/,<^2,56 /H-3", d, J2",3"=1o Hz, 1H/, <T3,17 /H-6« széles s, 2H/, <T3»3o /H^-5", d, Jgem=12 Hz, 1H/,

<6,80 /H-2 w , dd, J2n = 10 Hz, J 2W= 4Hz, IH/fkíOk/a-í', d, J s 12 Hz, lH/^4,88 /H-4» , széles t, 1H/, 0

(5*5 » 0y*7“—1 " » d, J1« = 4Hz, 1H/, <f5,35 /H-l, d, J , , = 2Hz,

1 H/ ppm.

Tömegspektrum: molekulasúly: 447.

A jellemző ionok tömegszáma /m/e/: 447, 332, 304, 160, 145,

127, 118, 110, 100.

5. példa

A 4. példa szerint előállitott sziszomicin-bázis 15 g-ját 60 ml ionmentes vizben feloldjuk, majd a kapott oldathoz keverés közben annyi 5 n kénsav oldatot csepegtetünk, hogy az oldat

8