179066. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daganaellenes poliszacharid-származékok előállítására

179066

4

Forró vízben, lúgos oldatokban, hangyasavban vagy dimetil-szulfoxidban oldódik.

3. Stabilitás:

Gőzben 120 °C-on 30 perág végzett sterilizálás során stabil, daganatellenes hatása nem csökken. Szobahőmérsékleten 0,5 n kénsavoldatban 24 órát kevertetve stabil, nem hidrolizál.

4. Az elemanalízis eredményei:

H: 5,67%, C: 38,30%.

5. Infravörös spektrum (KBr tablettában):

Amint az 1. ábrán látható, a glükozid-kötés abszorpciós sávja 894 cm"1 -nél jelen van.

6. Fajlagos forgatóképesség:

[a]p2 = + 22° (c = 0,2, H20).

7. Molekulasúly (gélszűréses módszerrel):

>1,500.000 [Sephadex G-200-on (Pharmacia.,

Svédország), Bio-Gel P-300-on és Bio-Gel A-1,5 m-en (Biorad Laboratory Inc., USA) végzett gélszűréssel.

A fentiekben végzett gélszűréssel a „Blue dextran 2000” (molekulasúly: körülbelül 2 millió) standardéhoz hasonló elúciós képet kapunk, így az anyag ily módon meghatározott molekulasúlya több, mint 1,500.000], körülbelül 2,000.000 (átlagos molekulasúly) [Bio-Gel A-5m-en (5,000,000 molekulasúly alatti molekulaszűrő) végzett gélszűréssel. Ionmentes vízzel történt gélszűréssel az eludó egy frakcióval korábban ment végbe, mint a „Blue dextran”-é],

8. Kémiai szerkezet:

(1) Cukorösszetétel:

A 2 n kénsavoldattal 100 °C-on 5 órán át végzett hidrolízis után vékonyrétegkromatogrammon és gázkromatográfiával az egyedüli kimutatható cukor - -komponens D-glükóz. A glükóztartalom fenol-kénsavas módszerrel meghatározva 98,4—99,8%.

Az anyag ultracentrifugás analízise egyetlen csúcsot mutatott.

(2) A cukor-komponens kapcsolódási formája:

Az anyagot a szokásos analitikai módszerekkel perjodátos oxidációnak, Smith-lebontásnak, metilezésnek, acetolízisnek, enyhe Smith-lebontásnak és metilezéses analízisnek vetettük alá, és az anyag kémiai szerkezetére az (I) képletű ismétlődő szerkezeti egységet állapítottuk meg.

A teljesen metilezett CVG CDCl3-ban 100 MHznél felvett magmágneses rezonandaspektruma a 2. ábrán látható. A 4,75 ppm-nél jelentkező Hí jel (í-glükozid kötés jelenlétét erősíti meg.

II. Biológiai tulajdonságok:

(1) Toxicitás:

1. Akut toxicitás:

Nem észleltünk elhullást, amikor CVG maximal! san elviselhető mennyiségét adtuk be szájon át egereknek és patkányoknak.

.1

2. Szubakut toxicitás:

Nem tapasztaltunk változást az általános kinézésben, testsúlyban, táplálék- és vízfelvételben és az általános biokémiai diagnózisban egérnél 100 mg/kg szájon át beadott vegyület hatására.

Néhány esetben a thymus súlyának növekedését észleltük.

Kórszövettani vizsgálatok során semmilyen változást nem észleltünk.

(2) Citotoxicitás (in vitro):

Raji-sejt tenyészetekben 1 mg/ml koncentrációnál nem észleltünk citotoxicitást.

(3) Daganatellenes hatás:

Sarcoma-180 daganatsejteket ültetünk be bőr alá 5 hetes JCL-ICR egerekbe (3 csoport, csoportonként 8 egér). A daganat beültetése után 24 órával a CVG-t intraperitoneálisan injektáljuk két csoportba. A kontroll csoportnak sóoldatot adunk. A beültetés után 3 héttel megfigyelt eredményt az 1. táblázatban láthatjuk.

1. táblázat

Beadott

mennyiség

(mg/kg)

A beadás módja

Átlagos daganatsúly (g ± átlagos hiba)

Inhibíciós arány (%)

kontroll

i.p.

2,152 ±0,491

0,1

i.p.

1,400 + 0,718

34,9

1

i.p.

0,406 + 0,211

81,1

(4) Daganatellenes spektrum:

Növekedésgátló hatásokat — beleértve a daganatmegszüntetést — észleltünk, amikor CVG-t adtunk S-180,Ehrlich caránoma és egyéb daganatoktól szenvedő egereknek, és ez az anyag hatásos volt methyl colanthren-nel előidézett tüdődaganattal és spontán emlődaganattal szemben is egereknél. A tények alapján a CVG nemcsak átültetett daganattal, hanem spontán daganattal szemben is hatásos.

(5) összegeződő hatás más daganatellenes anyagokkal:

Egyenként 10 egeret tartalmazó csoportokban, sarcoma-180 daganattal beültetett Swiss-egereknek intraperitonealisan hetente kétszer 1 mg/kg mitomycin C-t (MMC), 20 mg/kg endoxant (Ex) és 30 mg/kg 5-fluor-uraàlt (5-FU) adunk önmagukban vagy 1 mg/kg CVG-vel kombinálva. A daganatgátló hatást (%) 28 nappal a beültetés után a 3. ábrán láthatjuk.

(6) összegeződő hatás röntgen-sugárral besugárzott Ehrlich asdtes carcinománál:

Észrevehető daganatnövekedés-gátlást figyeltünk meg, ha röntgen-sugárral inaktivált Ehrlich ascites caránoma sejtekkel immunizált egereknek adtunk CVG-t 20 mg/kg nap adagban, jóllehet a CVG önmagában nem hatásos Ehrlich ascites daganat ellen. A 4. ábrán látható inaktivált Ehrlich ascites daganatsejtek és CVG kombinációjának hatása egereken (életmeghosszabbító hatás).

5

10

15

20

Ï5

10

35

40

45

50

55

60

65

2