179013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-35512 antibiotikum-keverék előállítására
37 179013 A 19. táblázatban olyan vizsgálatok eredményét mos csoporttal végeztünk fa padlójú ólakban tartva adjuk meg, amelyeket 80 szárnyassal, 12 párhuza- 32 állatokat. 38 19. táblázat Koncentráció Súlynövekedés % növekedés Takarmány % növekedés Kezelés (g/tonna) (g) a kontrolihoz hasznosítás a kontrolihoz képest képest Kontroll - 1898 - 2,250 A—35 512 B 20 1956* * 3,06 2,177+ 2,81 *P < 0,05 A találmány szerinti eljárással előállított A—35 20 512 antibiotikum-keverék és a keverék egyes komponensei igen hatásosan növelik a baromfiak növekedését, ha a hatóanyagot, az A-35 512 antibiotikum-keveréket, vagy a keverék egyes komponenseit 1-100 g/tonna takarmány mennyiségben adagoljuk. 25 A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük. 1. példa 30 A) Az A-35 512 antibiotikumok előállítása rázott tenyészetekben A Streptomyces candidus NRRL 8 156 törzs egy 35 liofilezett készítményét 1-2 ml steril vízben szuszpendáljuk. Ezzel a szuszpenzióval Bacto élesztőkivonat-maláta ki vonat (ISP No. 2, Difco Laboratories, Detroit, Michigan) agar-ferdét oltunk. A beoltott agar-ferdét 30 °C hőmérsékleten 7 na- 40 pon át inkubáljuk. 2 ml steril vizet adunk a kinőtt tenyészethez, majd a spórák fellazítására egy steril pipettával kavarjuk a felszínt. Ezután egy másik ISP No. 2 agar-ferdét oltunk a vizes spóraszuszpenzió 0,1 ml-ével. Ezt a tenyészetet 30 °C hőmérsékleten, 45 '7 napon át inkubáljuk. A kinőtt tenyészethez 5 ml vizet adunk, majd a spórák fellazítására steril pipettával kapargatjuk a táptalaj felszínét. A kapott spóraszuszpenzió 2,5 milliliterével 50 ml, az alábbiakban megadott összetételű vegetatív táptalajt ol- 50 tunk: Trypticase szójaleves (Baltimore Biological Laboratories, Cockeys ville, Md.) 30 g 55 Víz (desztillált) 1 liter A beoltott vegetatív tenyészetet 250 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikban 30 °C hőmérsékleten, 48 60 órán át olyan rázógépen inkubáljuk, amely 4,5 cm-es átmérőjű körökben percenként 250-et fordul. Az inkubált vegetatív tenyészet 0,5 milliliterével 50 ml, az alábbiakban megadott összetételű táptalajt oltunk: 65 Tápióka-dextrin 25,0 g/liter Glükóz 10,0 g/liter Ammóniumnitrát 2,5 g/liter Káliumklorid 1’5 g/liter Magnéziumszulfát i;i g/liter Vas(II)-klorid *4H20 o[o3 g/liter Cinkklorid 0,03 g/liter Káliumdihidrogénfoszfát 0,1 g/liter L-glutaminsav 1,0 g/liter DL-citrullin 0,’l g/liter Kalciumkarbonát 5;o g/liter Desztillált víz 1 literre feltöltve. A beoltott termelő tenyészetet 250 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikokban inkubáljuk 32 °C hőmérsékleten, 8—10 napon át, egy olyan rázógépen, amely 4,5 cm átmérőjű kör mentén percenként 250-et fordul. B) Az A-35 512 antibiotikumok előállítása tankfermentorban Nagyobb térfogatú inokulum előállítására a fentiekben megadott módon előállított 20 ml térfogatú vegetatív tenyészettel 400 ml, ezzel azonos összetételű második vegetatív inokulum táptalajt oldunk. Ezt a második tenyészetet 2 liter térfogatú lombikban 24 órán át, 32 °C hőmérsékleten olyan rázógépen inkubáljuk, amely percenként 250-et fordul egy 4,5 cm átmérőjű kör mentén. Az így előállított második vegetatív tenyészet 800 ml-ével 100 liter steril termelő táptalajt oltunk. A beoltott termelő táptalajt egy 165 liter hasznos térfogatú fermentorban 8—10 napon át 32 °C hőmérsékleten fermentáljuk. A táptalajon percenként 25 liter steril levegőt buborékoltatunk át, és hagyományos, percenként 200-at forduló keverővei keverjük. 2. példa Az 1. példa A) pontjában megadott eljárással előállított vegetatív tenyészetet későbbi felhaszná19
