179013. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-35512 antibiotikum-keverék előállítására
23 179013 24 Az NRRL8 156 mikroorganizmus színforrás-hasznosítási vizsgálatainak eredményeit az alábbiakban adjuk meg. Az eredmények ismertetésekor (növekedés mértéke) a következő jelzéseket használjuk: + = jó növekedés, pozitív hasznosítás (+) = gyenge-megfelelő növekedés (—) = gyenge növekedés, hasznosítás valószínűleg nincs- = nincs növekedés, nincs felhasználás 3. táblázat Szénforrás Hasznosítás Nincs (negatív kontroll) (-) D-glükóz (pozitív kontroll) (♦) L-arabinóz (-) Szacharóz (-) i-inozit (♦) D-mannit (♦) D-fraktóz « Rhamnóz (-) Raffinóz (-) D-xilóz (♦) Az A-35 512 antibiotikumokat termelő Streptomyces candidus NRRL8 156 törzs bizonyos tulajdonságai különböznek a Shirling és Gottlieb [Shirling és GottÜeb, Cooperative Description of Type Cultures of Streptomyces, III. Additional Species Descriptions from First and Second Studies, Intern. J. Systematic Bacteriol., 18/2, 69—189 (1968)] és Waksman [Waksman, The Actinomycètes, Classification, Identification and Descriptions of Genera and Species, II. kötet, Villiams and Wilkins Co., Baltimore, Md., (1961)] szerint leírt törzshöz képest. Ezeket a különbségeket a 4. táblázatban foglaljuk össze. 4. táblázat NRRL8 156 Közölt leírás Szénforrás hasznosítás L-arabinóz+ Rhamnóz+ i-inozit + — Zselatin elfolyósítás a 14. napon teljes lassú Hatás a tejre koaguláció, bizonyos mértékű tisztulás a 14. napon koaguláció nincs, jó peptonizáció Az A-35 512 antibiotikumok előállítására használt Streptomyces candidus törzset letétbe helyeztük a Northern Regional Research Center, U. S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Peoria, Illinois, 61604 törzsgyűjteményébe, ahonnan az megkapható az NRRL 8 156 szám alatt. Mint ahogy az más mikroorganizmusoknál is fennáll, az A-35 512 antibiotikumokat termelő Streptomyces candidus NRRL 8 156 törzs variálhat. Például, kaphatunk mesterséges variánsokat és mutánsokat az NRRL 8 156 törzsből különböző ismert mutagén hatások révén, mint például ultraibolya-sugárzással, Röntgen-sugárzással, nagy frekvenciás hullámokkal kivitelezett kezeléssel, radioaktív sugarakkal és különböző reagensekkel. Minden ilyen természetes és mesterséges variáns és mutáns, amely a Streptomyces candidus fajhoz tartozik, és képes az A-35 512 antibiotikumok termelésére, a találmány oltalmi körébe tartozik. A Streptomyces candidus NRRL 8 156 növesztésére használt táptalaj többféle lehet. A gazdaságos termelés, a jó kitermelés és a termék könnyű elkülönítése érdekében azonban bizonyos táptalajokat előnyösen használhatunk. így szénforrásként, a nagy térfogatokban végzett fermentációkkor, például szacharózt használunk, bár glükózt, tápióka dextrint, fruktózt, mannitot, maltózt, laktózt és más cukrokat is adagolhatunk a táptalajhoz. Nitrogénforrásként előnyösen oldható húspeptont használunk, bár szójababliszt, sertésvérliszt, aminosavak, mint például glutaminsav szintén előnyösen alkalmazható. A táptalajhoz adhatunk szervetlen sókat is, ezek között olyan általánosan használt oldható sók szerepelnek, amelyek cink-, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klór-, karbonát-, szulfát-, nitrát- és más ionokra disszociálnak. Adhatunk a táptalajhoz eszenciális nyomelemeket is, amelyek a mikroorganizmus növekedéséhez és kifejlődéséhez szükségesek. Ilyen nyomelemek általában szennyezőanyagként jelen vannak a táptalaj többi alkotórészében, még pedig olyan mennyiségben, amelyek kielégítik a mikroorganizmus igényét. Kis mennyiségű (0,2,ml/liter) habzásgátló szert, például polipropilén-glikolt adhatunk a nagy térfogatban kivitelezett fermentáció táptalajához, ha a habzás ezt szükségessé teszi. Nagy mennyiségű A—35 512 antibiotikum előállításához süllyesztett, levegőztetett fermentációt végzünk, tankfermentorban. Rázott lombikos tenyészetben az A-35 512 antibiotikumok kis mennyisége keletkezik. A nagy térfogatú fermentorok oltásakor előnyösen vegetatív inokulumot használunk, mivel ha a mikroorganizmus spóráival inokulálunk, az antibiotikum-termelésben lag mutatkozik. A vegetatív inokulum előállítására kis mennyiségű táptalajt spórákkal vagy a mikroorganizmus micélium-fragmentjeivel oltunk, amikor egy friss, aktívan növekvő tenyészetet kapunk. A vegetatív inokulummal ezután beoltjuk a nagy térfogatú fermentorban sterilezett táptalajt. Az A-35 512 antibiotikumokat termelő mikroorganizmus 20 °C és 40 °C közötti hőmérsékleten növekszik. Az A—35 512 termelése szempontjából a 30 °C és 34 °C közötti hőmérséklet az előnyös. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
