178756. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiolvédőcsoportok eltávolítására aminosavakból és peptidekből
21 178756 n Boc PMB I I-Asn-Phe-Phe -T rp -Lys -Thr-Phe-Thr-Ser-Cys -0*Bu-t oldunk. Az oldathoz 171 mg (0,4 millimól) Hg(CF3COO)2-t adunk és az elegyet szobahő- 5 mérsékleten 12 óráig keverjük. A reakcióelegybe kénhidrogén-gázt vezetünk be és a képződött fekete csapadékot Celite-szűrén leszűrve eltávolítjuk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot kevés 2-merkapto-etanolt tartalmazó 10 éterrel eldörzsöljük. A képződött port szűréssel összegyűjtjük és szárítjuk. Kitermelés: 193 mg. A vegyületet feloldjuk 500 ml dimetil-formamid- 15 ban, hozzáadunk 0,28 ml 10% trietil-amin/dimetil-formamidot, majd 30 mg 1,2-dijód-etánt. A reakdóelegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük és az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük és a képződött port 20 szűréssel összegyűjtjük és szárítjuk. Kitermelés: 158 mg. A vegyületet feloldjuk 3 ml trifluor-ecetsav-/víz 9:1 térfogatarányú elegyben és az oldatot szoba- 25 hőmérsékleten 30 percig rázzuk. A trifluor-ecetsavat 30 °C alatt, csökkentett nyomáson, 10 percig desztilláljuk. A maradékhoz étert adunk, a képződött csapadékot szűréssel összegyűjtjük és kevés vízben oldjuk. Az oldatot 2x7 cm-es Amberlite IRA-410 30 (acetát-forma) ioncserélő oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot elhagyó 60 ml effluenst 5,5 x 35 cm-es Sephadex LH—20 oszlopra visszük fel és 0,1 n ecetsavoldattal eluáljuk. Az 560—640 közötti frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. 35 Kitermelés: 20,4 mg [“Id* = —31,2° (c = 0,13, 1% ecetsav). vékonyrétegkromatográfia: Rf = 0,60 (n-butanol : piridin : ecetsav : víz 30:20: 40 ■6:24, Avicel), Rf = 0,40 (n-butanol : etil-acetát : ■'ecetsav . víz 1 :1 :1 : 1, szilikagél). Aminosav-analízis (6n HC1, 1I0°C, 24 óra): Lys 1,97 (2), Asp 1,01 (1), Tlu 1,05 (2), Ser 0,92 (1), Gly 1,00 (1), Alá 1,02 (1), fél Cys 1,58 (2), Phe 3,01 (3). Átlagos kinyerés: 82%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás p-metoxi-benzil-, 1-adamantil- vagy terc-butilcsoporttal védett tiolcsoportot vagy -csoportokat tartalmazó aminosavak vagy peptidek védőcsoportjainak eltávolítására, azzal jellemezve, hogy a védett aminosavat vagy pepiidet CX3COOH általános képletű karbonsav - ahol X jelentése hidrogén-, klór- vagy fluoratom - higany(Ii) sójával kezeljük, adott esetben oldószer jelenlétében. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy CX3COOH általános képletű karbonsavként ecetsavat használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy CX3COOH általános képletű karbonsavként trifluor-ecetsavat használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy CX3COOH általános képletű karbonsavként triklór-ecetsavat használunk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy védett aminosavként dszteint alkalmazunk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy védett peptidként dszteincsoportot vagy csoportokat tartalmazó pepiidet alkalmazunk. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a védőcsoportok eltávolítását ecetsav higany(II)-sójával, trifluor-ecetsavban végezzük. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a védőcsoportok eltávolítását trifluor-ecetsav higany(II)-sójával, ecetsavban végezzük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 824650 - Zrínyi Nyomda, Budapest 11
