178405. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergornin és béta-ergokriptin fermentációs előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALALMANY 178405 a Bejelentés napja: 1980. II. 8. (282/80) Nemzetközi osztályozás: C 07 D 13/00 C 07 D 519/02 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI Közzététel napja: 1981. VIII. 28. ' HIVATAL Megjelent: 1983. Feltalálók : Szabadalmas : Wack Géza mikrobiológus 20% Kiss János oki. vegyészmérnök 10% Lengyel Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Lászlóné dr. mikrobiológus 10% Nagy Lajos mikrobiológus 10% dr. Udvardy Rt., Budapest Nagy Istvánné orvos 20% Zalai Károly oki. gyógyszerész 15% Zsóka Istvánné mikrobiológus 15% Budapest Eljárás ergokornin és ß-ergokriptin fermentációs előállítására 1 A találmány tárgya új eljárás anyarozsalkaloidok, főként ergokornin és ß-ergokriptin előállítására új Claviceps purpurea törzzsel. Ismeretes, hogy az ergotoxin hidrogénezéssel előállított dihidroergotoxin gyógyszer hatóanyaga dihidroergokrisztin, dihidroergokornin és dihidroergokriptin keveréke [129 061 számú magyar szabadalmi leírás]. 1967- ben vált ismertté [W. Schliern és munkatársai : Experientia 23 991 (1967)], hogy az ergokriptinnek két módosulata van: a korábban azonosított a-ergokriptin mellett ß-ergokriptin is izolálható anyarozs drogokból. Előállítását drogextrakcióval, illetve félszintezéssel elvégezve lehetőség nyílt farmakológiai vizsgálatokra, a vegyület jellemző hatásai: adrenolitikus aktivitás, szerotonin antagonizmus, uterus motilitás, vasocularis tonus befolyásolása. A 824 987 számú belga szabadalmi bejelentés ismerteti az első főként ß-ergokriptint termelő Claviceps purpurea törzset, mely a Farmitalia saját gyűjteményében az FI 7374 jelzést viseli. E törzset szénforrásként például szacharózt, glukózt, mamutot, nitrogénforrásként például aszparagint, peptonokat, hidrolizált kazeint és ammóniumsókat tartalmazó táptalajon szaporítva levegőztetés mellett 24 °C-on 10—16 nap alatt 950—1240 gamma/ml összalkaloid szint érhető el, az alkaloid féleségek megoszlása 7:3a béta-ergokript in, és kísérő alkaloidokat illetően utóbbi jellemzően ergozinban gazdag. Afenti törzs terméke tehát ergotoxin gyártáshoz közvetlenül (ergozin elválasztás nélkül) nem használható. 2 Kísérleteink során mesterséges fertőzéssel nem kezelt rozstáblán vadon nőtt Claviceps szklerociumból a gombát kitenyésztettük és a 151 724 számú magyar szabadalmi leírás szerint eljárva ismételt szelekcióval, mely- 5 ben a telepek izolálását és a folyékony kultúrás dúsítást felváltva alkalmaztunk, egy stabil Claviceps purpurea variáns törzset nyertünk. A szelekció alapja, hogy a fenti szabadalmi leírás szerinti szilárd táptalajon az alkaloid termelő törzs színes 10 telepeket képez, és jól megkülönböztethető az alkaloidot nem termelő törzsek fehér telepeitől. Az alkaloid-termelő új törzs telepeit izoláljuk és úgynevezett differenciáló táptalajra oltjuk át dúsítás céljából. A differenciáló táptalaj elsősorban szacharózt, bo- 15 rostyánkősavat és glicint tartalmaz ásványi sók és szervetlen foszfátsók mellett. Az izolálást és dúsítást többször ismételve nyerjük az új variáns törzset a következő főbb jellemzőkkel: a törzs házi jele : CLY. A tenyészet növekedése Claviceps 20 vad kultúrához képest lassú, konídiumot nem termel, mikroszkópos morfológiája valamennyi tápközegben élesztőszerű, tehát a micéliumos alakra jellemző fonálszerű hifák hiányoznak. A törzs makroszkopikus jellemzése: 25 Szelektáló keményítő-triptofános agar táptalajon a törzs telepei: 10 napos korban: 6—8 mm átmérőjű, határozott szélű, ráncolt felületű narancs-rózsaszín telepek, 30 20 napos korban: 178405
