178404. lajstromszámú szabadalom • Eljárás magas heparintartalmu szervkivonatok előállítására
9 178404 10 4. példa 5,0 kg 1. példa szerint meghatározott minőségű heparin alapanyagot 10 egyenlő részre osztunk fel és a 0,5 kg-os adagokat a szakaszos ellenáramú extrakció előírásai szerint 5 extrakciós lépcsőben dolgoztuk fel. Az egyes extrakciós lépcsők kivitelezése a következő módon történt : Az első adag 0,5 kg szárított szervet 40 °C hőmérsékletű 6% nátriumklorid-tartalmú, 0,25 n nátriumhidroxid oldattal 3,2 liter extrakciós térfogatra állítjuk be. Az elegyet 20 percig 40 °C hőmérsékleten keverjük. 20 perc után a kivonatot vákuumban Büchner-tölcsérrel leszűrjük, a szűrőfelület 0,6 mm lyukbőségű fémszita. Az első extrakciós szűrletet összegyűjtjük, térfogatát megmérjük és heparinaktivitását megvizsgáljuk. A fémszitán maradó nedves szervet újból 40 CC hőmérsékletű 6% nátriumklorid-tartalmú 0,25 n nátriumhidroxid oldattal elkeverve 3,2 liter extrakciós térfogatot állítunk be. A már egyszer extrahált szerv második extrakcióját az előzőek szerint végezzük. Az első adag szárított szerv második extrakciós szűrletét a második 500 g-os szárított szervadaggal elegyítjük és az extrakciós térfogatot az előbbi oldatok alkalmazásával 3,2 literre beállítjuk. A további lépések teljes mértékben megegyeznek a szakaszos, ötlépcsős, ellenáramú extrakciós művelet sorrendjével. Az extrakciós térfogat mindenkor 3,2 liter, a hőmérséklet 40 °C. Az összegyűjtött extraktumok térfogata és heparinaktivitása a következő: Sorszám Szürlet térfogat Aktivitás (NE/ml) Heparintartalom (MNE) i. 1770 83 0,147 ii. 1810 118 0,214 in. 1790 133 0,238 IV. 1750 140 0,245 V. 1800 143 0,257 VI. 1770 153 0,271 VII. 1800 153 0,275 VIII. 1780 152 0,271 IX. 1815 149 0,270 X/l. 1790 153 0,274 X/2. lépcső 1800 52,5 0,095 X/3. lépcső 1850 16,4 0,030 X/4. lépcső 1830 5,2 0,009 X/5. lépcső 1780 1,8 0,003 Összesen: 2,599 A táblázat szerint 5,0 kg 90,4% szárazanyagtartalmú heparintartalmú nyersanyagból ötlépcsős szakaszos ellenáramú extrakcióval 2,599 MNE heparin nyerhető. A 10. adag extrakciós lépcsőjének heparinaktivitásából megállapítható, hogy kimerítő extrakció történt. A kitermelés gyakorlatilag azonos az 5. példában elért kihozatallal (98,3%). 5. példa Az 1. példa szerinti minőségnek megfelelő heparin nyersanyagot a 159 977 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban ismertetett „U” extraktorban folyamatos ellenáramú rendszerben extraháljuk. A szárított alapanyagot az extraktorba csigásadagolóval folyamatosan adagoljuk. Az adagoló felett elhelyezett szórófejen keresztül az adagolt termék súlyának megfelelő kétszeres térfogatban 70 °C hőmérsékletű, 0,55 n nátriumhidroxid oldatot adagolunk, amely 6% nátriumkloridot tartalmazott. A csigás adagolóban az adagolt anyag tartózkodási ideje 10 perc. Az U-extraktor egyes celláiba bevitt duzzasztott nyersanyaggal ellenáramban 6% nátriumklorid tartalmú 0,1 n nátriumhidroxid oldatot adagolunk. A berendezésben lejátszódó folyamatos ellenáramú extrakció közben 50 °C hőmérsékletet tartunk fenn, az anyagátadás elősegítése céljából az U-extraktor alján elhelyezett pulzáltató egységgel az anyagot lökésszerűen mozgatjuk. A folyamatosan képződő világos szalmasárga, csaknem átlátszó extraktlé térfogatát rotaméterrel mérjük és a heparinkoncentrációt 30 percenként mintavétellel határozzuk meg. Az ellenáramú extrakciós rendszerben folyamatosan képződő kivonat heparintartalmát ugyancsak folyamatos rendszerben választjuk le, a keletkező csapadékot pedig dobszűrővel nyerjük ki további feldolgozás céljaira. A feldolgozást 10 kg szárított nyersanyag/óra kapacitású berendezésben végezzük, ahol az anyag tartózkodási ideje 35 perc. 10 órás üzemeltetés után a képződött 210 liter kivonatból vett minta alapján a heparinaktivitás átlagosan 252 NE/ml. Ez a feldolgozott 100 kg 90,4%-os szárazanyagtartalmú termékre vonatkoztatva 52,9 MNE heparinkihozatalt jelent. Az U-extraktorból távozó nedves szervmaradékot heparinaktivitásra bevizsgálva azt tapasztaltuk, hogy az ellenáramú extrakció 2% alatti veszteséggel kivitelezhető. Az extrahált szervmaradék nagy fehérjetartalmú állati takarmányként kiválóan értékesíthető. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás állandó összetételű, alacsony zsír- és egyéb szennyezést tartalmazó, legalább 120 NE/ml heparintartalmú vizes kivonatok előállítására, azzal jellemezve, hogy 90—95 súly% szárazanyagtartalmú, heparinban dúsított amorf szemcsés, alaktartó, nagy fajlagos felületű nyersanyagot az adott feldolgozási rendszerre és nyersanyagra optimális, meghatározott hőmérséklettartományban és pH-értéken egy sóoldattal szakaszos vagy folyamatos ellenáramú extrakciónak vetünk alá. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az ellenáramú extrakciót 20— 80 °C közötti hőmérsékleten végezzük. 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
