178084. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás natív vindolin katarantin 3,4,-anhidro-vinblastin, leurozin, és egyéb diindol alkaloidok kinyerésére vinca rosea l drogból
5 178084 6 szerbe, vagy oldószerelegybe, célszerűen valamely benzolsorbeli szénhidrogén és klórozott szénhidrogén elegyébe, előnyösen benzol-kloroform elegybe átoldjuk, és az oldatot oszlopkromatográfiás módszerrel feldolgozzuk. Adszorbensként aluminium-oxidot,5 előnyösen részlegesen dezaktivált aluminium-oxidot alkalmazunk. Eluensként célszerűen szerves oldószerelegyet, előnyösen benzolt és kloroformot változó arányban tartamazó oldószerelegyet alkalmazunk. A kromatografálásnál kapott frakciókat 10 célszerűen vékonyrétegkiomatográfiás módszenei azonosítjuk. Az azonos alkaloid-komponenst tartalmazó eluátumfrakciókat egyesítjük. A vinkrisztint és vinblasztint tartalmazó frakciókat önmagáján ismert módon a 4-dezacetoxi-vinblasztint tártál- .5 mazó frakciókat egyesítés, majd csökkentett nyomáson történő bepárlás útján dolgozzuk fel. A nyers 4-dezacetoxi-vinblasztint kívánt esetben kristályosítással tisztijük A diindol-alkaloidok szűrésénél kapott anyalúg-20 ból további jelentős mennyiségű leurozint, valamint katarantint, vindolint és 3’4’-anhidro-vinblasztint nyerünk ki a találmány szerinti a) vagy b) eljárásváltozat szerint. Az a) eljárásváltozat értelmében oly módon 25 járunk el, hogy az anyalúg pH értéket 6—10-re állítjuk be, majd a leurozint, katarantint, vindolint és 3’,4’-anhidro-vinblasztint valamely szerves oldószerrel, célszerűen benzollal vagy benzolhomológgal, vagy valamely klórozott szénhidrogénnel vagy alifás 30 éterrel extraháljuk, és a kivont alkaloid-keveréket kromatografálással komponenseire bontjuk. A kromatografálást részlegesen dezaktivált alumíniumoxid adszorbensen végezzük. Eluens; benzol, majd benzol és klórozott szálhidrogén elegye. 35 A találmány szerinti b) eljárásváltozat szerint az anyalúgot 2,5-3,5 pH értékig savanyítjuk, majd a savas oldatból a vindolint benzollal vagy benzolhomológgal extraháljük. A szerves fázisból bepárlás és adott esetben tisztítás, mint pl. derítés és/vagy to kristályosítás útján a vindolint kinyerjük. A savas•vizes fázis pH-jának 5-6-ra történő korrigálása után a maradék 3 alkaloidot extraháljuk benzollal vagy valamely benzolhomológgal. A 3 komponensű extraktumot vagy kromatogra- 15 fálással bontjuk komponenseire (bj eljárásváltozat), adszorbensként részlegesen dezaktivált aluminiumoxidot tartalmazó oszlopon (adszorbens: részlegesen dezaktivált alumíniumoxid, eluens: benzol vagy homológja, majd benzol és klórozott szénhidrogén 50 elegye) vagy a bj változat szerint dolgozzuk fel. A bt eljárásváltozat értelmében a fenti 3 komponensű extraktumot bepároljuk. A bepárlási maradékot szerves oldószerből, előnyösen 1-5 szénatomos alkoholból kristályosítjuk. Kristályosán a 55 leurozin és a 3’4’-anhidro-vinblasztin keveréke válik ki, míg az anyalúg a katarantint tartalmazza. A kristálykeveréket előnyösen szétválasztás nélkül e poxidáljuk. Az e poxidál ást ismert módon szerves hidroperoxidokkal, mint pl. kunul- vagy 60 terc-butilhidroperoxiddal, alkálifém-hipohalogenidekkel, vagy oxigénnel, célszerűen a levegő oxigénjével végezhetjük. Ha epoxidáló szerként oxigént alkalmazunk, a reakció gyakorlatilag bármely szenes oldószerben szelektíven végbemegy. A lehetséges 65 szerves oldószerek közül a tetráhidrofurán vagy valamely szerves amino-vegyület, ezek közül is a dimetil-formamid a legelőnyösebb. Ha epoxidálószerként szerves peroxidokat alkalmazunk, a reakciót célszerű nitril-típusú oldószerben végezni. Az epoxidálást adott esetben reakciógyorsító, mint pl. fémkomplexek, fém vagy fémoxid katalizátorok, vagy nitril és/vagy azocsoportot tartalmazó gyökiniciátorok jelenlétében végezhetjük. A kristálykeveréket kromatográfiásan is szétválaszthatjuk, mely esetben a leurozin komponenst kinyerjük, a 3'4’-anhidro-vinblasztin komponenst pedig kívánt esetben a fenti módon leurorinná epoxidáljuk. A kromatográfiás módszereknél az eluátum frakciókat vékonyrétegkromatográfiás módszerrel azonosítjuk, (adszorbens: szilikagél, futtatóelegy: metilénklorid-metanol 5: 04 arányú elegye) vagy a XVIII amerikai egyesült államokbeli gyógyszerkönyv előírásai szerint. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa a) 1 kg őrölt levél-drogot 1 liter metanol és 0,25 liter 2%-os vizes kénsavoldat elegyével átnedvesítünk, majd 5 liter toluol hozzáadása után 1,5 órán át keverjük. A toluolos extrakciót még háromszor azonos mennyiségű toluollal megismételjük. A toluolos fázisokat egyesítjük, majd háromszor 5 liter 2%-os vizes kénsavoldattal alkaloid negativitásig kivonatoljuk. A savas, vizes kivonatokat egyesítjük és abból kétszer 1 liter benzollal a klorofillt és egyéb színező anyagokat eltávolítjuk. A benzoltól elkülönített vizes extraktumot tömény, vizes ammóniumhidroxid-oldattal 8,5-9 pH értékig lúgosítjuk, majd a lúgos oldatot négyszer 1 liter benzoŰal extraháljuk. A benzolos extraktumokat egyesítjük, vízmentes nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet szárazra pároljuk. A kapott kb. 10 g mennyiségű alkaloid báziskeverékből ismert módon kénsavas etanollal a diindol alkaloidok főtömegét 0,73 g szulfátsó keverék formájában leválasztjuk. A sókeveréket a 851 345 számú belga szabadalmi leírás szerint feldolgozva (az N-dezmetil-vinblasztint formilezéssel vinkrisztinné alakítva) a következő termékeket kapjuk. Leurozin (op.: 202-204 °C), vinblasztin-szulfát (op.: 284-285 °C), vinkrisztin (op.: 218-220 °C) és 4-dezacetoxi-vinblasztin (op.: 190-193 °C). b) a sókeverék szűrésénél kapott első anyalúgot (kb. 100 ml) 14 liter vízzel hígítjuk, majd a pH értéket 2,7-3,0-ra állítjuk be. A savas oldatot ötször 1 Éter benzollal extraháljuk, a fázisokat szétválni hagyjuk. Az egyesített savas fázist további feldolgozásra eltesszük (második anyalúg). A benzolos oldatokat egyesítjük, nátriumszulfáttal vizmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet szárazni pároljuk. A bepárlási maradékot 12 ni benzolban oldjuk 04 g aktívszénnel összerázzuk, majd 25 g IQ. aktivitású tlumíniumoxidból és benzolból kialakított oszlopon átszűrjük. Az oszlopot a derítés $
