178052. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás egy új antibiotikum, a tienamicin előállítására
33 mm 34 vákuumban rotációs bepárolóban 10 °C alatti hőmérsékleten 7 ml térfogatra töményítjük. A 720 hidroxilamin-kioltási optikai sűrűség egységű oldatot 1,7 cm átmérőjű, 90 ml, előzetesen a fentiek szerint mosott XAD—2 fenti gyantával töltött oszlopra visszük fel, az oszlopot használat előtt 5 °C-on desztillált vízzel egyensúlyba hoztuk. A minta után 2x2ml desztillált vizet adunk. Az ioncserélő oszlopot 2 nd/perc sebességgel desztillált vízzel előhívjuk. Az eluátumból 4nú-es frakciókat fogunk fel. A 109—301 ml között kapott frakciókat egyesítjük, és rotációs bepáiióban 10,3 ml térfogatra koncentráljuk. Az 589 hidroxilamin-kioltási optikai sűrűség egységet tartalmazó oldatot lioflízáljuk és 30.140 egység/mg számított aktivitású 23,6 mg antibiotikumot kapunk. Az így előállított antibiotikum fehér, amorf szálas szerkezetű szilárd anyag. Ha a kapott anyag egy mintáját üveg-kapillárisban 3 °C/perc sebességgel melegítjük, az anyag a folyékony fázist kihagyva a következő fokozatokban bomlik el: 130—140 °C-ig lágyulás következik be, miközben a szilárd anyag zsugorodik, ez a kontrakció 170—174°C-ig tart, eközben az anyag megsárgul, majd összezsugorodik, fokozatosan intenzívebb színű lesz, 180-200 °C-ig pirosas-barna színeződést figyelünk meg, végül az anyag elszenesedik, és 205 °C-nál csak a szilárd anyagnyomok maradnak. Ennek az anyagnak egy további mintáját spektrofotometriásán analizáljuk, az elemzés során az abszorpciós csúcs 296,5 nm-nél figyelhető meg, és =268,2. Elemanalízis a iH16N204S(NH3)o28 összegképletre: rendszerint a tiszta vegyület oldható pora, vagy enyhén savas steril vizes oldata. A következő módon állítjuk elő az egyes kikészítési formákat: Kapszula Kapszulánként tienamidn 400 mg laktóz (U. S. P.) mintegy 75 mg Körülbelül 475 mg-ot töltünk a kapszulákba. 10 A fenti példában a hatóanyagot és hígítószert jól összekeverjük, hogy homogén elegyet kapjunk, majd egyenként kemény-zselatin kapszulákba töltjük kézi vagy gépi úton. A keverést és a töltést 15 előnyösen olyan helyen végezzük, ahol a relatív nedvességtartalom kisebb, mint 40%. Tabletta Tablettánként 25 tienamidn 330 mg kalcium-foszfát 192 mg laktóz (U. S. P.) 190 mg kukorica-keményítő 80 mg magnézium-sztearát 8 mg 800 mg számított: talált: C =47,68%, 'N =11,52%, O =23,1%, C =46,68%, N =11,48%. H = 6,13%, S= 11,57%, H = 6,22%, A fenti példában a hatóanyagot kalcium-foszfáttal, laktózzal és a kukorica keményítőnek mint- 30 egy a felével keverjük össze. Az elegyet 15%-os kukorica-keményítő-péppel granuláljuk, majd először durván, majd 16 „mesh” szitákon ismét átszitáljuk. A maradék kukorica-keményítőt és magnézium-sztearátot a kapott elegyhez adjuk, majd tab- 35 lettákba préseljük, és ily módon 1,2 cm átmérőjű 800 mg súlyú tablettákat kapunk. Egy másik módszer szerint a hatóanyagot kalcium-foszfáttal, laktózzal és a kukorica-keményítő 40 felével összekeverjük. Az elegyet szárazon granuláljuk és ily módon tömör tabletta-szerű anyagot kapunk. Ezt az anyagot 16 „mesh” szemcseméretű granulátumokká aprítjuk. Kukorica-keményítőt és magnézium-sztearátot adunk hozzá, majd az elegyet 45 körülbelül 1,2 cm átmérőjű 800 mg súlyú tablettákká préseljük. Oldat (injekcióhoz) Ampullánként tienamicin 25 mg steril víz injekcióhoz (U. S. P.) összesen: 5 ml Szobahőmérsékleten vákuumban 4 óra hosszat szárítjuk az anyagot, az ennek következtében fellépő súlyveszteség 5,67%. A termék 1 mg/ml töménységű oldatát 10 mmólos kálium-foszfát-pufferban polarimetrjásai^ elemezve, a fajlagos optikai forgatóképesség [a]ln c = + 80. A nujolos minta infravörös spektruma (1. ábra) a jellemző abszorpciós csúcsokat 1765 cm-1, 1650-1550 cm“1, 2800-2500 cm-1 és 3500- 50 -3100 cm"1 értékeknél mutatja. A termék D20- ban oldott mintája 100 MHz-nél a következő NMR-spektrumot mutatja: S = 1,275-nél dublett, 5= 3,39-nél egy dublett pár és S =3,15 és A fenti példában a hatóanyagot a fenti arán.y- 5 = 4,20-nál multiple« jelentkezik, ezek csúcsok jel- SS nak megfelelő mennyiségű injekcióhoz való steril lemzőek a tienamidnra. vízben feloldjuk. Az oldatot „Selas gyertyán” ke-Az antibiotikumot tartalmazó készítményeket resztül, vagy „Millipore” membrán-szűrőn szűrjük, többféle dózis-egység formában, például szilárd sterilizáljuk. Az oldatot steril ampullákba töltjük, vagy folydeony, orálisan bevihető formában adagol- Az ampullákat és a tartalmukat megfagyasztjuk és hatjuk. A készítmények akár folyékonyak, akár 60 a vizet liofilizálással aszeptikusán eltávolítjuk. A ste- CTÜárHay dózis-egységenként 0,1-99%, előnyösen rü száraz szilárd anyagot tartalmazó ampullákat 10-66%’ hatóanyagot tartalmazhatnak. A ké- aszeptikusán lezárjuk. 5 ml steril injekdóhoz való szítmény általában az összsúlyra számítva 25- vizet adunk az ampullák tartalmához, hogy az —1000 mg, előnyösen 150-1000 mg hatóanyagot ampullákat parenterális adagolásra alkalmassá tetartalmaz. Parenterális adagolásnál a dózis-egység 65 gyük. 17
