177887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heparintartalmú nyersanyag előállítására
11 177887 12 Az autolízis eredményeképpen nyert termék heparinban dúsabb alapanyag előállítását teszi lehetővé. A példában nyers szárított terméket E jelű mintának nevezzük, és a 3. példával megegyező mennyiségek és arányok mellett extrakcióval feldolgoztuk. 5 A 3. és 4. példa szerinti minták összetételét és az egyes kísérletek eredményeit a 2. táblázatban foglaltuk össze. Az egzakt összehasonlítás érdekében kétfajta heparintartalmat és háromfajta anyaghányad-értéket számi- 10 tottunk. A kétfajta heparintartalom kiszámítása azért szükséges, mivel az alkalmazott kivonatolási módszer egyszeri szakaszos extrakció volt, ahol az extrakciós levek elválasztásánál a szitán maradó szervmaradékok különböző mennyiségben, egyensúlyt feltételezve, a 15 szűrt extrakt lével megegyező koncentrációjú extraktlevet tartalmaztak. Megjegyezzük, hogy ez a heparintartalom ismételt extrakcióval elvben kinyerhető. A 9. oszlopban levő érték a ténylegesen kinyert, a szűrt extraktlevek térfogata alapján kiszámolt értékek, míg a 20 13. oszlopban megadott ún. elméleti értékek a szervmaradék extrakciós lé tartalmát is figyelembe véve kiszámított elméletileg kinyerhető heparintartalmakat jelentik. A táblázat 12. oszlopában közöltük az egyes szervmaradékok extraktlé-tartalmát. Ezekből az értékekből meg- 25 állapítható, hogy a feldolgozásra kerülő alapanyag szárazanyag-tartalmának növelésével a szervmaradék extrakciótartalma csökken, azaz az extrakciós művelet nagyobb szárazanyag-tartalmú alapanyagból t öbbszöri extrakció esetén is hatékonyabban valósítható meg. A táb- 30 lázat 10. oszlopában megadott anyaghányad-értékek az 5. oszlopban feltüntetett ténylegesen bevitt súly és a 9. oszlopban megadott kinyert heparintartalom alapján lettek kiszámítva. All. oszlopban számolt értékek az előbbiek 100%-os szárazanyag-tartalomra (6. oszlop) vonatkoztatott adatai. All. oszlopban számolt ún. elméleti anyaghányad-értékek az elméleti heparintartalom alapján (13. oszlop) a 100%-os szárazanyag-tartalomra (6. oszlop) vonatkoztatott értékeknek felelnek meg. A 6. és 13. oszlop adatai alapján összehasonlíthatjuk az autolízis nélkül és autolízissel nyert termékek adott módszerrel extrahálható heparintartalmát. A táblázatból megállapítható, hogy az autolízis nélkül feldolgozott termékeknél a denaturált és szárított termékek anyaghányad-értéke egymással közel megegyező, és a nyers sertésvékonybél nyálkahártyához képest mintegy 10%-kal kedvezőbb. A denaturálási művelet során a szűrlettel számos inert anyag távolítható el. Elő-autolízis esetén a heparintartalom dúsulása sokkal nagyobb mértékű, körülbelül 30% a friss szervhez képest. A táblázatok alapján levonható az a következtetés, hogy az elő-autolízis után nyert denaturált-szárított nyersanyag heparintartalma azonos szárazanyag-tarta- _ lomra számítva jelentősen nagyobb, mint az elő-autolízis nélkül feldolgozott heparin alapanyagé. Az összehasonlító kísérletek azt is bizonyítják, hogy a szárítás nem okoz heparinkárosodást. A kapott új típusú nyersanyag tetszés szerinti ismert extrakciós módszerrel feldolgozható olyan heparinkészítménnyé, amelyből gyógyászati minőségű végtermék állítható elő. 2.táblázat 1 2 3 4 5 1 6 7 8 9 10 1 11 12 13 14 Feldolgozott Extrakciós lé Anyaghányad Szervámra-Elméleti Minta jele Anyag típus Elő-autolízis Szárazanyag (°/o) menynyiség (kg) szárazanyag (g) térfogata (ml) faeparinkoncentráció (NE/ml) heparintartalom (NE) eredeti súlyra (kg/ MNE) 100%-os szervre (kg/ MNE) dék extrakciós lé tartalma (ml) heparintartalom (NE) anyaghányad 100%-os szervre (kg/ MNE) A nyers mucosa ___ 6,4 7,31 468 6120 20,6 126 000 58,2 3,72 1740 162 000 2,89 C2 denaturált mucosa — 23,4 2,0 468 6600 22,5 148 000 13,5 3,16 1340 179 500 2,62 cn denaturált szárított mucosa 88,0 0,532 468 7030 23,1 162 500 3,27 2,88 860 182 000 2,57 E denaturált szárított mucosa + 90,4 0,518 468 7120 28,6 J 204 000 2,54 2,29 900 229 000 2,04 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás dúsított hat óanyag-tartalmú, állandó összetételű, alacsony zsírtartalmú és csíraszámú, morfológiai és hatóanyagtartalom-változás nélkül tárolható heparintartalmú nyersanyag előállítására állati szervek gyűjtése és feldolgozása útján, azzal jellemezve, hogy a heparintartalmú állati szerveket — előnyösen friss szerveket — szükséges esetben aprítás után, vizes közegben 10— 50 °C közötti hőmérséklet-tartományban 0,5—15 óra hosszat tartjuk, majd az előkezelt szuszpenzióból 75— 100 °C közötti hőmérsékleten vízoldhatatlan heparinfehérje-tartalmú komplexet választunk le, amelyet to- 55 vábbi — célszerűen 12—15 percig tartó — hőkezeléssel jól szűrhető aggregátumokká alakítunk, a kivált csapadékot mechanikai úton elkülönítjük, az izolált heparintartalmú nyersanyagot 90—95% szárazanyag-tartalom eléréséig, célszerűen 100 °C alatti hőmérsékleten, mor- 60 zsalékos formájú, alaktartó termék képződéséig szárítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 4—6 mm-re aprított állati szerveket alkalmazunk. 65 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 6
