177499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lúgos közegben reakcióképes szulfitcsoportot tartalmazó vegyületek abszorbciometriás meghatározására
3 177499 4 C -on, előnyösen 50 C'-on hőkezeljük,, majd lehűtjük és a képződött sárgától vörösbaraáig terjedő színt fotometráljuk. A találmány szerint oly módon járunk el, hogy a mérendő, lúgos közegben reakcióképes diszulfid vegyvileíből vízzel és/vagy vízzel elegyedő oldószerrel vagy oldószerkeverékkel pontosan ismert, a vizsgálandó anyagra nézve 10—300 mcg/ml koncentrációjú oldatot készítünk. Oldószerként alkalmazhatunk vizet, továbbá vízzel elegyedő, kis szénatomszámú egy vagy többértékö alifás alkoholokat, mint például metanolt, etanolt. 1,2-propiIénglikolt, glicerint, továbbá vízzel elegyedő kis szénatomszámú ketonokat, észtereket, ezenkívül dioxánt, formamidokat, valamint ezek elegyét. Ezután a vizsgálandó oldathoz 0,1%-os p-dinitrobenzol-oldatot adunk, majd az oldatot lúgosító-oldattal meglúgosítjuk. A p-dinitrobenzol-oldat készítéséhez vízzel elegyedő, kis szénatomszámú, egy vagy többértékű alifás alkoholokat, mint például metanolt, etanolt, 1,2-propilénglikolt, glicerint, továbbá vízzel elegyedő kis szénatomszámú ketonokat, észtereket, ezenkívül dioxánt, formamidokat vagy ezek célszerűen megválasztott elegyét alkalmazzuk. Lúgosító oldatként használhatunk bármely, a reakcióeleggyel elegyedő bázikus oldatot. Előnyösen alkalmazhatunk alkálifém-hidroxidot és/vagy alkálifém-karbonátot tartalmazó oldatokat, valamint ammóniumhídroxídot, továbbá kvaterner ammónium-hidroxidokat vagy megfelelően bázikus aminokat. Célszerűen olyan vizes oldatot alkalmazunk, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, káliumkarbonátra nézve pedig 0,6%-os. Á reakcióelegyet homogenizálás után jól lezárt kémcsövekben 30 percig 50 C°-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Az abszorpciót ezután az értelemszíerűen készített összehasonlító oldattal szemben leolvassuk. Az így képződött, fotometrálásra kerülő szín - a mérendő anyagtól függően - sárgától vörösbaraáig terjed. A reakció az általunk vizsgált 10—300 mikrogram hatóanyag/ oldószer-elegy ml koncentráció-zónában igen jól követi a Lambert—Beer-tÖrvényt. A rekkció relatív standard deviációja - egy törzsoldatból, tizenegy mérésből számolva — +1,8%, tehát a módszer jól reprodukálható. A találmány szerinti meghatározási módszer előnye, hogy a meghatározást zavaró anyagokat nem tartalmazó gyógyszerkészítményekben lévő, lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületekre is alkalmazható, a hatóanyag izolálása nélkül. További előnyt jelent a »korábbi eljárásokhoz képest, hogy a módszer egyszerű, gyors és pontossága a szokásos spektrofotometriás eljárások hibahatárán belül van. A találmány szerinti meghatározási módszer külön előnye, hogy molekulák bizonyos fajta bomlásait is méri, hát stabilitási vizsgálatoknál is felhasználható. A találmány jelentőségét és hasznosságát a fentiekén kívül — kiemeli még az oxitocin. inzulin és az aprofinin ismert biológiai fontossága is. A találmány szerinti eljárás kivitelét az alábbi példák .szemléltetik : Î. példa Oxitocin mérése 2.00 ml 200 mcg/ml koncentrációjú, vizes oxitocin oldathoz 4,00 ml 0,1%-os, 96%-os etanollal készített p-dinitrobenzol-oldatot adunk. Ezután a reakcióelegyet 1 ml olyan vizes oldattal lúgos,ttjuk, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, káíkimkarbonátra nézve pedig 0,6%-os. A reakcióelegyet összetűzés után 30 percig 50 C’-on tartjuk, jól lezárt kémcsövekben. Összehasonlító oldatként 2,00 ml vízzel készített, ugyanilyen reakcióelegyet használunk. Hőkezelés után az oldatokat szobahőmérsékletre hűtjük, és az abszorpciót az értelemszerűen készített összehasonlító oldattal szemben, 1 cm-es küvettában, 404 nm-nél Spektromom—204 spektrofotométeren leolvassuk. A reakció jól követi a Lambert—Beer-törvényt. 2. példa N,N'[ditiobisz-(etilén-karboml)]diglicin-dinátrium mérése 2.00 ml 125 meg/ml körüli pontosan ismert koncentrációjú vizes N,N'[ditiobisz(etilén-karbonil)]diglicin-dinátrium-oldathoz 4-,00 ml 0,1%-os, metanol-l,2-propilénglikol 1:1 arányú elegyével készült p-dinitrobenzol-oldatot adunk. Baltán a reakcióelegyet 1 ml olyan vizes oldattal lúgosítjuk, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, káliumkarbonátra nézve pedig 0,6%-os. Homogenizálás után az oldatokat 30 percig 50 C°-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük és az abszorpciót az értelemszerűen készített összehasonlító, oldattal szemben 404 nm-nél, 1 cm-es küvettában Spektromom—204 spektrofotométeren leolvassuk. A reakció jól követi a Lambert—Beer-törvényt. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületek abszorpciómetriás meghatározására, azzal jellemezve, hogy a meghatározandó vegyületből a mérésre alkalmas koncentrációjú vizes és/vagy vízzel elegyedő oldószeres oldatot készítünk, ezután az oldathoz p-dinitrobenzol vízzel elegyedő oldószeres oldatát adjuk és meglúgosítjuk, ezt követően az oldatot homogenizáljuk és 30—80 C°-on, célszerűen 40—60 C°-on, előnyösen 50 C°-on hőkezeljük, majd lehűtjük és a képződött sárgától vörösbaraáig terjedő szint fotometráljuk, 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vízzel elegyedő oldószerként kis szénatomszámú egy vagy tőbbértékű alkoholokat, ketonokat, észtereket, továbbá dioxánt, formamidokat vagy ezek célszerűen megválasztott elegyét alkalmazzuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
