177499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lúgos közegben reakcióképes szulfitcsoportot tartalmazó vegyületek abszorbciometriás meghatározására
3 17749° 4 C'-on. előnyösen 50 C -on hőkezeljük. nv.ijd lehűljük és a képződön sátgától vörösharaáig lerjedő színt iötometráljuk. A ta lálmány szerint oly módon járunk el, hogy a mérendő, lúgos közegben reakcióképes diszuüid vegyüleiból vízzel és/vagy vízzel elegyedő oldószerrel vagy oldószerkeverékkel pontosan ismert, a vizsgálandó anyagra nézve 10—300 ivtcg/ml koncentrációjú oldatot készítünk. Oldószerként alkalmazhatunk vizet, továbbá vízzel elegyedő, kis szénatomszámú egy vagy többértékű alifás alkoholokat. mint például metanolt, etanolt. 1,2-propilénglikolt. glicerint, továbbá vízzel elegyedő kis szénatomszámú Ketonokat, észtereket, ezenkívül dioxánt. formamidokat, valamint ezek elegyét. Ezután a vizsgálandó oldathoz 0,1 %-os p-dinitrobenzol-oldatot adunk, majd az oldatot lúgosító-oldattal meglúgosítjuk. A p-dinitrobenzol-oldat készítéséhez vízzel elegyedő, kis szénatomszámú, egy vagy többértékű alifás alkoholokat, mint például metanolt, etanolt, 1,2-propilénglikolt, glicerint, továbbá vízzel elegyedő kis szénatomszámú ketonokat, észtereket, ezenkívül dioxánt, formamidokat vagy ezek célszerűen megválasztott elegyét alkalmazzuk. Lúgosító oldatként használhatunk bármely, a reakcióeleggyel elegyedő bázikus oldatot. Előnyösen alkalmazhatunk alkálifém-hidroxidot és/vagy alkálifém-karbonátot tartalmazó oldatokat, valamint ammóniumhídroxidot, továbbá kvaterner ammónium-hidroxidokat vagy megfelelően bázikus aminokat. Célszerűen olyan vizes oldatot alkalmazunk, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, káliumkarbonátra nézve pedig 0,6%-os. A reakcióelegyet homogenizálás után jól lezárt kémcsövekben 30 percig 50 C°-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Az abszorpciót ezután az értelemszerűen készített összehasonlító oldattal szemben leolvassuk. Az így képződött, fotometrálásra kerülő szín - a mérendő anyagtól függően - sárgától vörösbarnáig terjed, A reakció az általunk vizsgált 10—300 mikrogram hatóanyag/ oldószer-elegy ml koncentráció-zónában igen jól követi a Lambert—-Beer-törvényt. A reakció relatív standard deviációja - egy törzsoldatból, tizenegy mérésből számolva — ± 1,8%, tehát a módszer jól reprodukálható. A találmány szerinti meghatározási módszer előnye, hogy a meghatározást zavaró anyagokat nem tartalmazó gyógyszerkészítményekben lévő, lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületekre is alkalmazható, a hatóanyag izolálása nélkül. További előnyt jelent a korábbi eljárásokhoz képest, hogy a módszer egyszerű, gyors és pontossága a szokásos spektrofotometriás eljárások hibahatárán belül van. A találmány szerinti meghatározási módszer külön előnye, hogy molekulák bizonyos fajta bomlásait is méri, t^hát stabilitási vizsgálatoknál is felhasználható. A talá’many jelentőségét ós hasznosságát a fentieken kívül kiemeli még az o.xitocin inzulin és a? apreíinin ismert biológiai fontossága is. A találmány szerinti eljárás kiviteléi n alábbi példák szemléltetik : !. példa Oxitocin mérése 2.00 ml 200 meg/mí koncentrációjú, vizes oxitocin oldathoz 4,00 ml 0,1 %-os, %%-os eianollai készített p-dinitroben7ol-oldatot adunk. Ezután a reakcióelegyet 1 ml olyan vizes oldattal lúgc-dtjok, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, kában"karbonátra nézve pedig 0,6%-os. A reakcióelegyet összerázás után 30 percig 50 C°-on tartjuk, jól lezárt kémcsövekben. Összehasonlító oldatként 2,00 ml vízzel készített, ugyanilyen reakcióelegyet használunk. Hőkezelés után az oldatokat szobahőmérsékletre hűtjük, és az abszorpciót az értelemszerűen készített összehasonlító oldattal szemben, 1 cm-es küvettában, 404 nm-nél Spektromom—204 spektrofotométeren leolvassuk. A reakció jól követi a Lambert—Beer-törvényt. 2. példa N,N'[ditiobisz-(etilén-karbonil)]diglicin-dinátrium mérése 2.00 ml 125 mcg/ml körüli pontosan ismert koncentrációjú vizes N,N'[ditiobisz(etilén-karbonil)]diglicin-dinátrium-oldathoz 4,00 ml 0,1 %-os, metanol- 1,2-propilénglikol 1:1 arányú elegyével készült p-dinitrobenzol-oldatot adunk. Ezután a reakcióelegyet 1 ml olyan vizes oldattal lúgosítjuk, amely nátriumhidroxidra nézve 1,2%-os, káliumkarbonátra nézve pedig 0,6%-os. Homogenizálás után az oldatokat 30 percig 50 C°-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük és az abszorpciót az értelemszerűen készített összehasonlító oldattal szemben 404 nm-nél, 1 cm-es küvettában Spektromom—204 spektrofotométeren leolvassuk. A reakció jól követi a Lambert—Beer-törvényt Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás lúgos közegben reakcíóképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületek abszorpciómetriás meghatározására, azzal jellemezve, hogy a meghatározandó vegyületből a mérésre alkalmas koncentrációjú vizes és/vagy vízzel elegyedő oldószeres oldatot készítünk, ezután az oldathoz p-dinitrobenzol vízzel elegyedő oldószeres oldatát adjuk és meglúgosítjuk, ezt követően az oldatot homogenizáljuk és 30—80 C°-on, célszerűen 40—60 C°-on, előnyösen 50 CD~on hőkezeljük, majd lehűtjük és a képződött sárgától vörösbamáig terjedő színt fotometráljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vízzel elegyedő oldószerként kis szénatomszámú egy vagy többértékű alkoholokat, ketonokat, észtereket, továbbá dioxánt, formamidokat vagy ezek célszerűen megválasztott elegyét alkalmazzuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 J
