177499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lúgos közegben reakcióképes szulfitcsoportot tartalmazó vegyületek abszorbciometriás meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 177499 Bejelentés napja: 1977. IX. 30. (RÍ 647) Közzététel napja: 198:. III. 28. Megjelent: 1982. XII. 31. Nemzetközi osztályozás • ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL G 01 N 21/00 Feltaláló : Szabadalmas dr. Lukáts Béla oki. gyógyszerész, Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt.. Budapest. Budapest. Eljárás lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületek abszorpciometriás meghatározására i A találmány lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületek meghatározására vonatkozik. Közelebbről megjelölve: a találmány tárgya eljárás oxitocin, inzulin, aprotinin, valamint N,N'[ditiobisz-(etilénkarbonil)]diglicin-dinátrium egyszerű, gyors, specifikus abszorpciómetriás meghatározására, alapanyagban és a meghatározást zavaró anyagokat nem tartalmazó készítményekben. Ismeretes, hogy az igen bonyolult molekulájú oxitocin, inzulin és aprotinin tartalmi meghatározása biológiai értékméréssel, illetve aktivitás méréssel történik. Ismeretesek továbbá a fenti három, biológiailag fontos anyag meghatározására analitikai eljárások is. Az inzulinra vonatkozóan ismeretes egy papírkromatográfiát. majd elúciót követő fotometriás értékmeghatározás, ez azonban félkvantitatív jellegű és meglehetősen hosszadalmas. Az aprotinin meghatározására oszlopkromatográfiát követő fotometriás tisztasági vizsgálat (fehérje-tartalom) áll rendelkezésre, de ez nem alkalmas az anyag tartalmi meghatározására. Az oxitocin szubsztancia vizsgálatával kapcsolatban ismeretes egy peptid-tartalom meghatározás, mely 0,1 normál nátriumhidroxidos közegben 292 nm-en leolvasott extinkció alapján történik. Ez a meghatározás azonban csak a molekula tirozin (fenol típusú aminosav) részére jellemző, az oxitocin molekalában pedig más, a mérési UV tartományban aktív csoport nincs. Esetleges egyéb fenolos típusú szennyező anyagok, illetve egyéb abszorbeáló anyagok a meghatározást nagy mértékben zavarják. A zavaró 2 hatás azért is jelentős, mert az oxitocinhoz képest a tirozin kis molekulasúlyú, így annak kis mennyisége nagy oxitocin-mennyiségnek felel meg. A mérés tehát a tirozin tartalomra jellemző és nincs kötve az oxitocin fajlagos kémiai 5 szerkezetéhez. Az N,N'[ditiobisz-(eíi!én-karboni!)]diglicin-di-nátrium meghatározására alkalmas módszer a szakirodalomban nem volt ismeretes. Sürgős igénye merült fel az inzulin, az oxitocin, az apro- 10 tinin és az N.N'[ditiobi,sz-(etilén-karbonil)]diglicin-dinátrium vonatkozásában annak, hogy olyan meghatározási módszer álljon rendelkezésünkre, amely egyszerűen és gyorsan elvégezhető és a meghatározást zavaró anyagokat nem tartalmazó gyógyszer-készítményekben lévő vegyüle- 15 tekre is alkalmazható, a hatóanyag izolálása nélkül. Azt találtuk, hogy egyes, lúgos közegben reakcióképes diszulfid-vegyületek p-dinitrobenzollal lúgosítás, hotnogenizálás és ezt követő hőkezelés során sárgától vörösbarnáig terjedő szín képződése mellett reagálnak, mely fotometrálásra alkalmas és igy ennek alapján az említett vegyületek egyszerűen, könnyen, gyorsan és pontosan meghatározhatók. A találmány tehát eljárás lúgos közegben reakcióképes diszulfid csoportot tartalmazó vegyületek abszorpciometriás meghatározására, melyre jellemző, hogy a meghatározandó vegyületből a mérésre alkalmas koncentrációjú vizes és/vagy vízzel elegyedő oldószeres oldatot készítünk, ezután az oldathoz p-dinitrobenzol vízzel elegyedő oldószeres oldatát adjuk és meglúgosítjuk, ezt követően a/ oldatot homogenizáljuk és 30—80 C -on, célszerűen 40- f>0 20 25 30 177499
