177478. lajstromszámú szabadalom • Eljárás élő mumpsz-vakcika előállítására
5 177478 6 gyengítése tengeri malac veséjéből készített sejttenyészeten végezhető — a kanyaróvírus-vakcinát is ezen a sejttenyészeten állítják elő —, aminek az az előnye, hogy a vakcina mentes lesz szennyezőanyagoktól, továbbá hogy ez a sejttenyészet olcsón és könnyen beszerezhető. Tekintettel ar- 5 ra, hogy maga a vakcina előállítása is nagy hozammal és olcsón végezhető, a találmány szerinti oltóanyag beszerzési költsége elhanyagolható a például a fentiekben említett Jeryl Lynn törzsből készített vakcináéhoz képest. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina areaktogén, im- 10 munogén és epidemiológiailag hatásos, továbbá felhasználhatósági időtartama legalább egy év. A találmányt közelebbről az alábbi kiviteli példával kívánjuk megvilágítani. Példa 15 A „Szófia 6” törzset olyan beteg gyermekből izoláljuk, aki jobboldali járványos mumpsz kórképét mutatja. A betegség harmadik napján a gyermektől nyálat veszünk, majd megfelelő kezelés után a nyállal tenyésztést végzünk öt olyan kémcsőben, amelyek tengeri malac veséjéből ké- 20 szült sejttenyészetet tartalmaznak. A megfertőzött sejtek nem mutatnak morfológiai változásokat. A negyedik, hatodik, nyolcadik és tizedik napon végzett haemadszorpció eredménye negatív. A tizedik napon a kémcsövekben lévő sejttenyészet-folyadékot összeöntjük. Az így kapott keve- 25 rék haemagglutinációs vizsgálatának eredménye is negatív. A keverékkel öt új kémcsőben sejttenyészetet fertőzünk meg, és így úgynevezett „vak passzálás”-t végzünk. A megfertőzött tenyészetek most sem mutatnak morfológiai elváltozást, de a haemadszorpciós vizsgálat a negyedik 50 napon pozitív eredményt ad. A nyolcadik napon összegyűjtött, illetve egyesített tenyészet-folyadék képezi a további passzálások kiindulási anyagát. A törzset összesen 25 passzálásnak vetjük alá tengeri malac veséjéből készült sejttenyészeten, mindegyikben egyetlen szelekciót végezve, 35 amely műveletek eredményeképpen a törzs megfelelően legyengül. Az utolsó passzáláskor kapott anyagot hasznosítjuk az élő mumpsz-vakcina előállítására. Félkész vakcina előállítása céljából először 30 1200 ml-es térfogatú üvegedényben és 3 150 ml-es térfogatú 40 üvegedényben tengeri malac veséjéből sejttenyészetet készítünk. Az egyréteg képzése utáni negyedik napon a nagyobb térfogatú üvegedényekből 27-ben a tenyészetet az előző bekezdésben kapott legyengített törzzsel megfertőzzük. A további 3 nagyobb méretű üvegedényben, illetve a 45 3 kisméretű üvegedényben lévő tenyészeteket nem fertőzzük meg, ezek képezik a kontrolltenyészeteket. Fenntartó táptalajként a DIFCO Laboratories detroiti (Michigan állam, Amerikai Egyesült Államok) cég által szállított Parker 199 táptalajt használunk. A második, negyedik és a 50 hatodik napon a replikálódott vírust tartalmazó folyadékot összegyűjtjük, továbbá az első két esetben friss táptalajt adagolunk, míg a harmadik esetben az említett folyadék elkülönítése után a táptalajt eldobjuk. Az így elkülönített félkész terméket ezután a vírus titerének, a sterilitásnak, az albumintartalomnak, valamint állatokkal szembeni specifikusságának, ártalmatlanságnak és atoxieitásnak megállapítása céljából vizsgálatoknak vetjük alá. A tenyésztés végén a három kisméretű üvegedénybe embertől, csirkétől, illetve tengeri malactól származó eritrocitákat merítünk az esetlegesen szennyezőként jelenlévő vírusok haemadszorpeiójának megállapítására, továbbá a három nagyméretű kontroll üvegedényben lévő folyadékot megvizsgáljuk sterilitás és vírusos fertőző anyagok távollétének ellenőrzése céljából. A kontrollok vizsgálatát követően a félkész terméket összekeverjük stabilizátorként használt szacharózzal és zselatinnal, majd a kapott keveréket 1 ml-es ampullákba töltjük, ezután pedig liofilizáljuk. A szárított terméket ismét megvizsgáljuk laboratóriumi állatokkal szembeni ártalmatlanság és atoxieitás szempontjából, továbbá 20 gyereken mutatott reaktogén hatás megállapítására. Végül az így kapott ampullasorozatot olyan kísérőlevéllel látjuk el, amelyen feltüntetjük az egyes ampullákban lévő dózis nagyságát, továbbá a felhasználhatósági időtartamot. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás élő mumpsz-vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy a 111. szám alatt deponált „Szófia 6” törzset beteg személyből újszülött tengeri malac veséjéből készült szövettenyészeten izoláljuk, majd ugyanezen a sejttenyészeten végzett passzálásokkal legyengítjük és az így kapott vírust önmagában ismert módon élő mumpsz-vakcinává alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a vírus legyengítése céljából végzett passzálások számát 12 és 25 között választjuk meg. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az újszülött tengeri malac veséjéből készült sejttenyészetet a mumpsz-vírussal a tenyészet készítése utáni 3—5. napon fertőzzük meg. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fertőzést a sejttenyészet súlyára vonatkoztatva 0,01—1-szeres mennyiségű oltóanyaggal végezzük. 5. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a legyengített vírus elkülönítését a tenyésztés második, negyedik és hatodik napján végezzük, és csak a folyadékfázist különítjük el. 6. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a víruslenyészetet liofilizáljuk. éspedig 48 órán át 50 C-os bepárlóval. a szárító kamrában pedig a nyomást legfeljebb 76 Pa értéken és a szárítás végén a kamrában a hőmérsékletet legfeljebb 25 C-on tartjuk. A kiadásért felei : a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 82.6506.66-42 Alföldi Nyomda. Debrecen - Felelős vezető : Ben kő István igazgató 3
