177458. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 1-(1,3-dioxolán-2-il-metil)-1H-imidazol származékok előállítására
11 177458 12 100 g körüli súlyú nőstény Wistar-patkányokat használunk kísérleti állatként. Az állatokat méheltávolításnak és petefészekeltávolításnak vetjük alá, majd a műtéti beavatkozás után három héttel szubkután hetenként egyszer három héten át 100 pg 5 ösztradiolt adunk be szézámolajban oldva. Az így kiváltott pszeudociklust hüvelykenetek mikroszkóp alatti vizsgálatával ellenőrizzük. A kísérleti állatoknak tetszés szerinti mennyiségű táplálék és víz áll rendelkezésére. 10 A patkányokat intravaginálisan 48 órán át 37 °C-on Sabouraud-féle táptalajon tenyésztett és nátrium-klorid-oldattal hígított, 8 • 10s sejtet tartalmazó Candida albicans tenyészettel fertőzzük meg. A fertőzést a kiváltott pszeudodklus megjele- 15 nésére utaló jelektől függően a sebészeti beavatkozás utáni 25. és 32. nap közötti napon hajtjuk végre. A kísérleti vegyületeket orálisan adjuk be a fertőzés napjával kezdődően két napon át naponta. 20 Mindegyik kísérletnél placebóval kezelt kontrollállatokat is alkalmazunk. Az eredményeket úgy értékeljük ki, hogy néhány nappal a fertőzés után steril tamponokkal hüvelykenetéket veszünk, majd a tamponokat Petri-csészékben levő Sabouraud-féle 25 táptalajra helyezzük és a csészéket 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. Ha a Candida albicans nem növekszik, azaz az állatok a kísérlet végén negatívnak tekinthetők, akkor ez a kísérleti vegyülettel végzett kezelés eredménye, minthogy a placebóval 30 kezelt állatok egyikénél sem kapunk negatív eredményt, vagyis mindegyik megfertőződik. Az alábbi I és II táblázatokban azoknak a kísérleti vegyületeknek a legkisebb orális dózisát adjuk meg, amelyek 14 nappal a fertőzés után hatásosak. B) kísérlet: I általános képletű vegyületek hatásának vizsgálata pulykabegy-candidiasis esetén 14 napos pulykák begyét megfertőzzük 48 órán át 37 °C-on Sabouraud-féle táptalajon növekedett és nátrium-klorid-oldattal hígított, 4 • 106 sejtet tartalmazó Candida albicans tenyészettel, 1 ml-nyi oltóanyagot használva. A kísérleti vegyületet előzetesen 500 mg laktonnal keverjük össze, majd az így kapott keveréket bármiféle adalék alkalmazása nélkül 1000 g liszthez keverjük. A kísérleti vegyület koncentrációját így a lisztre vonatkoztatva mg/kg-ban adjuk meg. A fertőzés napjától számítva 13 egymást követő napon át a kísérleti állatok a kísérleti vegyülettel adalékolt lisztet kapják. A kísérlet végén az összes állatot leöljük. A boncolásnál a begyeket eltávolítjuk, kiürítjük és Ultra-turrax típusú keverőben 15 ml steril nátrium-klorid-oldattal aprítjuk. Az esetleg létező tenyészetek számlálását Sabouraud-féle agar-agaron végezzük, és a kapott eredményeket szintén az I és II táblázatban adjuk meg ED50-ban, amely megfelel a kísérleti vegyület azon dózisának, mely a kísérleti állatok fele esetében a begyet Candida albicans fertőzésére nézve negatívvá teszi. I. táblázat I-c általános képletű vegyületek Y Szabad bázis vagy só Vaginális candidiasis patkányokon, legkisebb hatásos orális dózis mg/kg-ban Begy-candidiasis pulykákon EDS0 mg/kg táp egységekben 1 H-imidazol-1 -il szabad bázis 1,25 8 ÍH-1,2,4-triazol-l-il szabad bázis 1,25 16 lH-pirrol-l-il szabad bázis 2,50 125 lH-pirazol-l-il szabad bázis 2,50 16 2-metil-1 H-imidazol-1 -il szabad bázis 10 125 2-fenil-1 H-imi dazol-1 -il 2 • HN03 5 125 3 -oxo-5-me til-2,3-dihidro-4H-1,2,4-triazol-4-il szabad bázis 10 3-oxo-2-(n-propil)-2,3- -dihidro-4H-l ,2,4-triazol-4-il szabad bázis 10 3-oxo-2-izopropil-2,3-dihidro-4H-1,2,4-triazol-4-il szabad bázis 10 6
