177261. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új aminoglikozid-származékok előállítására
13 177261 14-hidroxi-szukcinimidet adunk hozzá. 206 mg (1,0 millimól) diciklohexilkarbodiimid hozzáadása után azonnal színtelen kristályok válnak ki. A reakcióelegyet 1,5 órán át keverjük, majd egy éjjelen át hűtőszekrényben állni hagyjuk. A kristályokat leszűrjük és az oldhatatlan anyagot etilacetáttal mossuk. A mosófolyadékokkal egyesített szűrletet vákuumban bepároljuk. 390 mg maradékot kapunk, op. : 154—161 C°. A terméket aceton-hexán elegyből átkristályosítjuk. 277 mg N-hidroxi-szukcinimido-DL-l-benziloxikarbomil-3-hidroxipirrolidin-3-karboxilátot kapunk. Kitermelés: 76,5%. Op.: 159—161 C°. IR: v nu-Ío1 (cm-1): 3350, 1815, 1785, 1740, 1690. max 3. példa l-N-(4-hidroxi-piperidin-4-karbonil)-kanamicin A előállítása. 1,55 g (2,5 millimól) 6’-N-tercier butoxikarbonil-kanamicin A (lásd vizsgálat nélkül közzétett 50—140420 sz. japán nyilvánosságrahozatali irat) és 24 ml 50%-os 1,2-dimetoxi-etán oldatához 1,53 g (4,06 millimól) N-hidroxi- I -szukcinimido-N-benziloxikarbonil-4-hidroxi-piperidin-4-karboxilát és 24 ml 1,2-dimetoxi-etán oldatát csepegtetjük 2—3 C°-on 2 óra alatt, az elegyet szobahőmérsékleten 14,5 órán át keverjük, majd vákuumban 35 C°-nál alacsonyabb fürdőhőmérsékleten bepároljuk. A fehér habszerű maradékot (3,2 g) 20 ml 90%-os trifiuorecetsavban oldjuk és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1- , órán át állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 ml 50%-os vizes metanolban oldjuk és 1 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogén-atmoszférában 3 órán át hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot (4,15 g) 10 ml vízben oldjuk, az oldatot 100 ml Amberlite CG 50—n (NH+) adszorbeáljuk és az oszlopot 240 ml vízzel mossuk, majd gradiens módszerrel 1000 ml vízzel és 1000 ml 1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk (egy frakció 10 g). A 91—108. sz. frakcióból nyert eluátumot (475 mg) 10 ml vízben oldjuk és 100 ml Amberlite CG 50- n (NH%) adszorbeáljuk. Az oszlopot 20 ml vízzel mossuk és 1000 ml vízzel és 1000 ml 1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. A 89—95 sz. frakcióból nyert eluátumot (270 mg) 6 ml vízben oldjuk, az oldatot 100 ml Amberlite CG 50- n (NH|‘) adszorbeáljuk, az oszlopot 30 ml vízzel mossuk és 1000 ml vízzel és 1000 ml 0,5 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. A 89—95 sz. frakcióból nyert eluátumot (270 mg) 6 ml vízben oldjuk, az oldatot 100 ml Amberlite CG—50—n (NH+) adszorbeáljuk, az oszlopot 30 ml vízzel mossuk és 1000 ml vízzel és 1000 ml 0,5 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. A 159—166 sz. frakcióból nyert eluátumot liofilizáijuk. 71 mg l-N-(4-hidroxi-piperidin-4-karbonil)-kanamicin A-t kapunk. Kitermelés 6%. ía]r>4+86,3 ± 1,2° (c = 1,016%,, vízben). Vékonyrétegkromatográfia (kovasavgél F,54, Merck) :RF = 0,45 (metanol és tömény ammónia 1:1 arányú elegyében). A kanamicin A Rf értéke 0,25. 4. példa 1 -N-(4-hidroxi-piperidm-4-karbonil)-tobramicin előállítása. a) 9,0 g ( 17,9 millimól) tobramicin-dihidrát és 32£,ml víz oldatához 322 ml piridint, 32 ml trietilamint és 2,64 g ( 18,4 millimól) tercier butoxikarbonilazidot adunk, az elegyet szobahőmérsékleten egy éjjelen át állni hagyjuk, majd vákuumban 40 C-on bepároljuk. A kapott terméket 100 ml vízben oldjuk és az elegyet vákuumban bepároljuk. Ezt a műveletet háromszor megismételjük. 11,95 g maradékot kapunk. A fenti maradékot 60 ml vízben oldjuk és 450 ml Amberlit CG—50-on (NH4+) adszorbeáljuk. Az oszlopot 500 ml vízzel mossuk, gradiens módszerrel 1000 ml vízzel és 1000 ml 0,1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk, majd 4100 ml 0,1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. Egy frakció súlya 15 g. A 141—200 sz. frakcióból 4,70 g 6’-N-tercier butoxikarbonil-tobramicint kapunk. Kitermelés: 46,4%. [<x]2íj5 = +110,3 ± 1,6 (c = 0,940%, vízben). Elemi analízis: C,_,H45N50- YoH,0 képletre számított C% = 47,90; ' H% = 8,00; N% = 12,15 talált C% = 47.79; H% = 7,92; N%= 11,78 b) 1,81 g (3,0 millimól) fentiek szerint előállított 6*-N-lercier butoxikarbonil-tobramicint 5 ml víz és 5 ml dimetilformamid elegyében oldunk és az oldathoz keverés közben 2 óra alatt 0—5 C'-on 0,748 g (3,0 millimól) N-benziloxikarbonil-szukcinimid és 8 ml dimetilformamid oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet ugyanezen a hőmérsékleten egy éjjelen át keverjük. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A maradékot (3,17 g) 40 ml vízben oldjuk és 4 x 30 ml etilacetáttal extraháljuk. A vizes fázist 100 ml Amberlite CG 50-en (NFÇ ) adszorbeáljuk, az oszlopot 1700 ml vízzel és 1700 ml 0,05 n ammóniumhidroxiddal a gradiens módszerrel, majd 1500 ml 0,1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk. Egy frakció = 18 ml. A 13—132. sz. frakcióból 877 mg 6’-N-tercier butoxikarbonil-2’-N-benziloxíkarbonil-tobramicint kapunk. Kitermelés: 40%. A 114—132. sz. frakciót liofilizáljuk és a termék fizikai állandóit meghatározzuk. [ajy = +87,2± 1,2' (c = 1,023%, vízben). Elemi analízis C^H^NjO,, ± 15H,0 képletre számított C% = 51,09; H% = 7,47; N% = 9,61 talált C% = 51,09; H% = 7,47; N% = 9,37. IR : v KBr (cm '): 3355. 1697. max VRK (kovasavgél, 60 F254 ; Merck) RF = 0,91 (izopropilalkohol. tömény vizes ammóniumhidroxid-oldat és kloroform 4:1:1 arányú elegyében); a 6’-N-tercier butoxikarbonil-tobramicin RF értéke 0.08). c) 397 mg (0,566 millimól) 6’-N-tercier butoxikarbonil-2’-N-benziloxikarbonil-tobramicint 50%-os vizes dimetilformamidban oldunk és az oldathoz keverés közben 0—3 C -on 80 perc alatt 319 mg (0,679 millimól) N-hidroxiv -szukcinimido-N-benziloxíkarbonil-4-hidroxi-piperidin-4-karboxilát és 6 ml dimetilformamid oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet a fenti hőmérsékleten 50 percen át, majd szobahőmérsékleten 4 órán keresztül keverjük és vákuumban bepároljuk. A színtelen habszerű maradékot (787 mg) 8 ml 90%-os trifiuorecetsavban oldjuk és az elegyet szobahőmérsékleten 1,5 órán át kevetjük és bepároljuk. A maradékot 3 ml ecetsav, 0,6 ml víz és 3 ml metanol elegyében 334 mg 5%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort leszűrjük és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot (1,25 g) 4 ml vízben oldjuk és az oldatot 30 ml Amberlite CG—50-t (NH4+) tartalmazó oszlopon adszorbeáljuk. Az oszlopot 300 ml vízzel mossuk, majd a gradiens módszerrel 1000 ml vízzel és 1000 ml 1 n ammóniumhidroxiddal eluáljuk (egy frakció 10 ml). 5 '0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
