177133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-és helyzetben alfa-aminooxisavat tartalmazó angiotenzin-II-antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
9 177133 10 tanol-éter átcsapással tisztítjuk. így 2,0 g (74%) Boc-Arg(Tos)—Val—Tyr(Bzl)—Ile—His—Pro-Ile— —ONB-hez jutunk (Rf =0,1), amelyet 30 ml metanol : ecetsav : víz = 5:1:1 elegyben feloldunk és hozzáadunk 1,0 g 10%-os csontszenes palládiumot. Ezután 5 órán keresztül hidrogén gázt buborékoltatunk át V oldaton, majd a katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk és 100 ml éterrel eldörzsölve és leszűrjük a Boc—Arg(Tos)-Val—‘Tyr—Ile—His—Pro —Ile—OH részlegesen védett heptapeptidet. Súlya: 1,22 g (75%). Rf=0,8. Ebből 0,6 g (0,5 mmól)-t oldunk 5 ml 8 n sósavas dioxánban, majd 20 perces kezelés után 50 ml száraz éterrel kicsapjuk a szabad heptapeptidet (Rf = 0,1) szüljük és 20—20 ml éterrel kétszer mossuk. Azonnal feloldjuk 15 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,45 g (1,2 mmól) Boc—OGly-OPFP-t. 30 perc múlva a reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot feloldjuk 30 ml 3:1 arányú kloroform : dimetilformamid elegyében, majd 15—15 ml 10%-os citromsavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 15 ml etilacetáttai eldörzsöljük, szüljük és 10 ml etilacetáttai mossuk. így 0,46 g (72%) Boc—OGly—Arg(Tos)—Val—Tyr—Ile-His—Pro—Ile-OH-t kapunk. Rf = 0,23, Rf = 0,40. 3. lépés Védőcsoport eltávolítása 0,46 g (0,35 mmól) Boc—OGly—Arg(Tos)—Valkyr—Ile—OH-t oldunk 2 ml cseppfolyós hidrogénfluoridban és hozzáadunk 0,5 ml tioanizolt. Az oldatot 1 órán keresztül 0 °C-on tartjuk, majd 100 ml éter hozzáadásával a pepiidet kicsapjuk, szüljük és 30—30 ml éterrel kétszer mossuk. Súlya 0,35 g (100%). Ezt a hidrogénfluoridos sót a megadott módon tisztítjuk. Az (aminooxiacetíl1, Ile8)-angiotenzin-II analóg jellemzői: Rf=0,26, Rf=0,56, Rf=0,57, ECiu (a glutaminsavhoz viszonyított elektroforézises mozgékonyság) = 1,00, Aminosav-analízis: Pro: 1,02 (1), Val: 1,0 (1), Ile: 1,98 (2), Tyr: 0,65 (1), His: 1,0 (1), Arg: 1,03 (1). 2. példa (L-a-AminooxípropíoníI ', Ile8 )-angiotenzín-II előállítása 1. lépés Boc-OAla-Arg(Tos)-Val-Tyr-IIe-His-Pro-Ile—OH előállítása 0,6 g (0,5 mmól) Boc-Arg(Tos)—Val-Tyr-Ile—His—Pro—Ile—OH-t (lásd 1. példa 2. lépés) 5 ml 8 n sósavas dioxánban feloldunk, majd 20 perc múlva a szabad heptapeptidet (Rf=0,l) száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és mossuk. Azonnal feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 0,7 g (1,9 mmól) Boc—OAla—OPFP-t. 30 perc múlva az oldatot bepároljuk, a maradékot feloldjuk 30 ml kloroform : dimetilformamid = 3 : 1 elegyben és 15—15 ml 10%-os vizes citromsavoldattal és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a maradékot 15 ml etilacetáttai eldörzsölve szűrjük, mossuk. Súlya: 0,55 g(84%), Rf=0,43, Rf = 0,80. 2. lépés Védőcsoportok eltávolítása 0,52 g (0,42 mmól) Boc—OAla-Arg(Tos)-Val—Tyr—He—IBs—Pro—Ile—OH-t 2 ml cseppfolyós hidrogénfluoridban feloldunk és hozzáadunk 0,55 ml tioanizolt. Az oldatot 1 órán át 0 °C-on tartjuk, majd száraz éterrel kicsapjuk, szűrjük és éterrel mossuk. így 0,41 g (OAla1, Ile8 )-angiotenzin-II-t kapunk, amelyet a fentiekben megadott módon tisztítunk. Rf =0,32, Rf=0,5§, Rf=0,59. EC;iu = 1,0, Aminosav-analízis: Pro: 1,0 (1), Val: 1,1 (1), Ile: 2,02 (2), His: 0,9 (1), Tyr: 0,95 (1), Arg: 1,05 (1). 3. példa (Aminooxiacetil1, Leu8)-angiotenzin-II előállítása 1. lépés Boc-Arg(Tos)—Val—Tyr(Bzl)-Ile—His(Dnp)— —Pro—Leu—ONB 4,2 g (12 mmól) Leu—ONB • HBr-t 50 ml kloroformban oldunk és hozzáadunk 1,68 ml trietilamint és 3,81 g (10 mmól) Boc—Pro—OPFP-t, 20 perces szobahőmérsékleten történő keverés után az oldatot 30—30 ml 10%-os vizes citromsavoldattal kétszer, majd 30 ml vízzel egyszer kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után kapott védett dipeptidet (Rf = 0,8) izolálás nélkül 20 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és 10 perc múlva az oldatot 60 ml száraz éterrel hígítjuk és bepároljuk. A szabad dipeptidet (Rf =0,56) izolálás nélkül 50 ml kloroformban felodljuk, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 8,8 g (15 mmól) Boc-His(Dnp)-OPFP-t. 30 perc múlva az öldathoz 1,65 ml N,N-dimetilaminoetilamint adunk, majd 10 perc múlva 30-30 ml 10%-os vizes citromsav-oldattal, n sósav-oldattal, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő szárítás és bepárlás után a védett tripeptidet (Rf =0,65) izolálás nélkül 25 ml 8 n sósavas dioxánban feloldjuk, és a szabad tripeptidet (Rf = 0,47) 120 ml száraz éterrel kicsapva szűrjük, mossuk. Azonnal feloldjuk 50 ml kloroform és 20 ml dimetilformamid elegyében, trietilaminnal a pH-t 8-ra állítjuk és hozzáadunk 6,0 g (15 mmól) Boc-Ile-OPFP-t. 30 perc múlva az oldószert elpárologtatjuk, a maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk és az oldatot 30-30 ml 10%-os vizes citromsavoldattal, n sósavval és vízzel kirázzuk. Vízmentes nátriumszulfáttal történő 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
