177070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BM.123 gamma antibiotikum, alkilezett származékainak előállítására
17 177070 18 6. táblázat folytatása Karbonil-reagens Termék ED50 (5) mg/kg 2-Metilacetecetsav•etilészter 1 -Metil-2- karbetoxipropil-BM1237 0,18 1,2 Norbornanon Norbornil-BM1237 0,18 7,5 5-Hexen-2-on l-Metil-5--pentenil-BM1237 0,18 7,5 4-Hidroxi-3--metil-2--butanon l-Metil-2-(3-hidroxi-2--metil-propil)-BM1237 0,18 1,18 2-Nonanon 1-Metil-oktil-BM1237 0,37 1,4 5-Hidroxi-2-pentanon l-Metil-4--hidroxi-butil-BM1237 0,18 1,3 4-Terc-butil-ciklo-hexanon 4-Terc-butilciklohexil-BM1237 0,12 0,84 Formaldehid Metil-BM1237 0,12 Acetaldehid Etil-BM1237 0,38 A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként felhasznált BM1237 antibiotikumot (BM 123)3 antibiotikummal együtt) a következő fermentációs eljárással állíthatjuk elő: Az NRRL 8050 letéti számú, Nocardia nemzetségbeli törzsét folyékony táptalajon tenyésztjük. Az antibiotikum-termeléshez felhasználható táptalajok asszimilálható szénforrást (így keményítőt, cukrot, melaszt, vagy glicerint), asszimilálható nitrogénforrást (így fehérjét, fehérje-hidrolizátumot, polipeptideket, aminosavakat vagy kukoricalekvárt) és szervetlen kationokat és anionokat, így kálium-, magnézium-, kalcium-, ammónia-, szulfát-, karbonát-, foszfát- és klorid-ionokat tartalmaznak. A táptalajhoz nyomelemeket, így bőrt, molibdént és rezet is adhatunk, ezeket az anyagokat rendszerint a korábban említett tápanyagforrások szennyezésként tartalmazzák. A fermentációt levegőztetés közben végezzük, a táptalaj felszínére vagy felszíne alá steril levegőt vezetünk. A fermentlevet mechanikus keverővei keverjük. Kívánt esetoen a fermentléhez habzásgátló anyagot, például Hoaag FD 82 kereskedelmi nevű terméket is adhatunk. A fermentációhoz felhasznált oltóanyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 500 ml térfogatú lombikba 100 ml táptalajt töltünk, a táptalajt sterilizáljuk, majd a steril folyékony közeget az NRRL 8050 letéti számú törzs ferde agar-tenyészetéből elkülönített spórákkal oltjuk be. Rendszerint _a következő összetételű táptalajt használjuk fel: Bacto-tripton 5g élesztőkivonat 5g marhahúskivonat 3g glükóz 10g víz ad 1000 ml A lombikokat forgó rázógépen, erélyes rázás közben 30-48 órán át 25-29 °C-on, előnyösen 28 °C-on inkubáljuk. Ezután a kapott inokulumot sterilizált, csávarkupakos edényekoe töltjük, és 0 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten tároljuk. Az így kapott inokulumot a következőkben az inokulumkészítés első szakaszában is felhasználhatjuk. A fentiek szerint előállított oltóanyaggal egy 20 liter űrtartalmú üveg-fermentorba töltött, 12 liter térfogatú, az előző lépésben alkalmazottal azonos összetételű táptalajt oltunk be, és az elegyet steril levegővel végzett levegőztetés közben 30-48 órán át inkubáljuk. A következő műveleti lépésben az így kapott, 12 liter térfogatú inokulumot használjuk fel oltóanyagként. Ebben a műveleti lépésben, amely az inokulumkészítés harmadik és egyben utolsó lépése, a fenti módon kapott inokulumot 300 liter, alábbi összetételű, steril folyékony táptalajhoz adjuk: oldható húskivonat 15 g ammóniumszulfát 3 g dikálium-hidrogénfoszfát 3 g kalciumkarbonát 1 g magnéziumszulfát-heptahidrát 1,5 g glükózx 10 g víz ad 1000 ml XA glükózt külön sterilizáljuk. A rendszert 0,4-0,8 1/1 táptalaj x perc mennyiségű steril levegővel levegőztetjük, és 150 -300 fordulat/perc sebességgel keverjük. Az inkubálást 25-29 °C-on, rendszerint 28 °C-on végezzük. 48-72 óra elteltével a tenyésztést leállítjuk, és az így kapott inokulumot 3000 liter fermentációs közeghez adjuk. A BM123/Í és MB1237 antibiotikum fermentációs előállításához előnyösen a következő összetételű közeget használjuk fel: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
