176827. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló, nitrogéntartalmú poliszacharidok előállítására coriolus nemzetségbeli gombák vizes extrakciójával
5 176827 6 A találmány szerinti eljárás során vizes oldószerként az ismert műveletekben szokásosan felhasznált oldószereket alkalmazhatjuk. Oldószerként például vizet, vizes sav- vagy lúgoldatokat, vizes karbamid-oldatot vagy vizes aminosav-oldatokat használhatunk fel. 1 súlyrész kiindulási anyagra vonatkoztatva általában 5—100 súlyrész, célszerűen 10—50 súlyrész vizes oldószert alkalmazunk. A találmány szerinti eljárás során vizes oldószerként célszerűen vizet vagy híg (legföljebb 1 normál) vizes lúgoldatokat használunk fel. A következő műveleti lépésben a kapott extraktumból szokásos finomítási műveletekkel, például ultraszűréssel, kisózással, dialízissel és/vagy inverz ozmózissal eltávolítjuk a kismolekulasúlyú anyagokat. A „kismolakulasúlyú anyagok” megjelölésen 5000-nél kisebb molekulasúlyú 15 termékeket értünk. E finomítási műveletben kiváló tumorgátló hatással rendelkező nitrogéntartalmú poliszacharidokat különítünk el. A találmány szerinti eljárással elkülönített nitrogéntartalmú poliszacharidok kiváló tumorgátló hatással 20 rendelkeznek. E vegyületek különösen előnyösen alkalmazhatók a tömör Sarcoma—180 tumor gátlására. Miként az egéren végzett kísérletek eredményei igazolják, e területen a hatóanyagok hatásukat nemcsak intraperitoneális, hanem orális adagolás esetén is kifejtik. A ta- 25 lálmány szerinti eljárással elkülönített nitrogéntartalmú poliszacharidokat tehát igen előnyösen használhatjuk fel rákellenes gyógyszerek hatóanyagaiként. Az extrakciós művelettel elkülönített nitrogéntartalmú poliszacharidok az immunreakciókat is fokozzák. 30 Kísérleteink során megállapítottuk, hogy ezek a hatóanyagok nemcsak a sugárkezelésre való érzékenységük miatt gyógyszeresen kezelt rákbetegeken gátolják meg a gyógyszer-okozta mellékhatások fellépését, hanem az operált vagy vértranszfúziót kapott betegek csökkent ellenállóképességét, illetve fizikai erőnlétét is ellensúlyozzák, továbbá a csökkent immunitású vagy rossz erőnléti állapotban levő egyének vírus- vagy baktériumfertőzésekkel szembeni ellenállóképességét is fokozzák. Az extrakcióval elkülönített hatóanyagok orális adagolás esetén javítják a beteg májfunkcióját, fokozzák a beteg étvágyát, ellensúlyozzák a bélműködési zavarokat, 5 és vizeletelhajtó hatást is fejtenek ki. E hatóanyagok a lepra kezelésében is hatásosnak bizonyultak. A találmány szerinti eljárással tehát a nitrogéntartalmú poliszacharidokat (amelyek nemcsak intraperitoneális, hanem orális adagolás esetén is kiváló tumorgátló 10 hatást fejtenek ki és egyéb értékes gyógyászati aktivitásokkal is rendelkeznek) viszonylag egyszerű eljárással és igen jó hozammal különíthetjük el Coriolus-nemzetségbeli gombákból. A találmány szerinti eljárás ennek megfelelően igen nagy haladást jelent a Basidiomycetes-eredetű rákellenes anyagok ipari elkülönítésének területén. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa Mesterségesen tenyésztett Coriolus versicolor (Fr.) Quél FERM—P 2414 gombafaj micéliumait 10% víztartalomig szárítjuk, majd a micéliumtömeget öt részre osztjuk. Minden egyes micéliumtömeg-részlethez 12,5- szörös súlyú vizet adunk, majd a keverékeket autoklávokba töltjük, és a 2. táblázatban megadott körülmények között extraháljuk. A kapott extraktumokat szűrjük, majd a szűrleteket ismert módon 72 órán át 5 °C-os vízzel szemben dializáljuk. A dialízist Visking Tube típusú csöves dializátorban (gyártja a Union Carbide Coip. cég [Amerikai Egyesült Államok]) végezzük. A dialízis során elkülönítjük az extraktumban levő kismolekulasúlyú (azaz 5000-nél kisebb molekulasúlyú) anyagokat. 35 A dializált oldatot betöményítjük, majd a kapott májbarna, porszerű, 7% vizet tartalmazó anyagot elemezzük. Az elemzések eredményeit az 1. táblázatban közöljük. 1. táblázat Színreakciós elemzések eredményei Reagensek, ill. reakciók a-naftol —• kénsav (Molish-reakció) indol — kénsav (Dish-reakció) antron — kénsav fenol — kénsav triptofán — kénsav Lowry-Folin reakció sósavas hidrolízis, majd ninhidrin-reakció ! bíbor I barna zöldeskék I barna bíborvöröses barna kék bíborvöröses kék Megjegyzés ! szacharidokra jellemző színreakció szacharidokra jellemző színreakció peptid-kötésre jellemző színreakció j a-aminosavakra jellemző színreakció A kapott termék molekulasúlya 100 000-nél nagyobb. Az elemzési eredmények alapján megállapítható, hogy az extrakciós művelettel elkülönített termékek nitrogéntartalmú poliszacharidok, amelyek a nitrogénatomokat elsősorban peptid-kötések formájában tartalmazzák. A kapott termék tumorgátló hatását a következő módszerrel vizsgáltuk : Egerek hasüregébe Sarcoma—180 tumorsejteket ültettünk át, majd 7 nap elteltével (amikor a sejtek már kellő mértékben elszaporodtak) 106 sejtet szubkután úton egerek hónaljába ültettünk át szilárd tumor előidézése céljából. A hatóanyag intraperitoneális adagolását 24 órával az átültetés után kezdtük meg. A hatóanyagot 10 mg/kg-os dózisokban adagoltuk. Az állatokat 60 minden második napon egy alkalommal kezeltük, és öszszesen 10 kezelést végeztünk. Ennek megfelelően a kezelési időszak során az állatoknak 20 g testsúlyra (egy egér átlagos testsúlya) vonatkoztatva összesen 0,2 mg hatóanyagot adtunk be. 25 nappal az átültetés után a tumo- 65 rókát kioperáltuk, majd lemértük a tumorok súlyát. 3
