176825. lajstromszámú szabadalom • Elárás zöldség- és gyümölcslevek illetve zöldség- és gyümölcspépek előállítására alkalmas endo-poligalakturonáz enzimkészítmény előállítására
5 176825 6 végezzük. A 28 °C-ra lehűtött tápközeget 101 Aspergillus awamori gomba 24 órás vegetatív tenyészetével oltjuk be. A tenyészetben percenként 1 táptalaj-térfogatnak megfelelő levegőt áramoltatunk át. Keverési sebesség 300 fordulat/perc, a készülékben levő nyomás 0,5 att. A tenyészet oxigén-ellátottsága 80 mmol/l/h. 72—78 órás, 28 °C-on történt tenyésztés után a micéliumot keretes szűrőprés segítségével választjuk el a fermentlétől. A fermentlé Na-polipektát szubsztrátumon mért aktivitása: (SPA£?-p)= 100 000 1/h/l. (100 000 1/h/l endopoligalakturonáz aktivitás azt jelenti, hogy 1 liter enzim 1 óra alatt 50 °C-on 100 000 liter 0,5%-os Na-polipektát oldat kezdeti specifikus viszkozitását képes 75%-kal csökkenteni.) A fermentlé pH-ját 3,5—4,5 értékek közé állítjuk be és 38 °C-on bepároljuk. A sűrítmény aktivitása 300 0001/h/l, a kitermelés: 93%. A sűrítményt filtrex szűrőlemezen sterilre szűrtük. 3. példa 990 1 6% refrakciójú répakivonat; (NH4)2S04 0,7%; MgS04 0,05%; KH2P04 0,01%; MnS04 0,001%; ZnS04 0,001%; Co(N03)2 0,005%; maláta-kivonat 0,15%; kukoricalekvár 1%, összetételű táptalajt 120 °C- on 50 percig sterilezünk, majd a 28 °C-ra lehűtött tápközeget 100 1 24 órás Aspergillus awamori gomba vegetatív tenyészetével oltjuk be. A fermentáció során alkalmazott keverési sebesség 230 fordulat/perc. A tenyészeten percenként 1 táptalaj-térfogatnak megfelelő levegőt áramoltatunk át. A fermentorban levő nyomás 0,5 att, az oldott oxigén-koncentráció 45 mmol/l/h. A 76 órás 28 °C-on történő tenyésztés után a micéliumot keretes szűrőprés segítségével választjuk el a fermentlétől. A fermentlé Na-polipektát szubsztrátumon mért aktivitása 150 000 1/h/l. A fermentlé pH-értékét 3,5—4,5 értékek közé állítjuk be és a fermentlét 36—38 °C-on bepároljuk. A sűrítmény aktivitása 350 000 1/h/l, a kitermelés 90%. A sűrítményt Filtrex szűrőlemezen sterilre szűrtük. 4. példa 99018% refrakciójú répakivonatot 0,6% (NH4)2S04-t 0,05% KH2P04-ot 0,001% MnSCVet 0,001% ZnS04-et 0,005% Co(N03)2-t 0,15% malátakivonatot és 1% kukoricalekvárt összekeverünk, 120 °C hőmérsékleten 50 percen át sterilezzük, majd a 28 °C-ra lehűtött tápközeget 100 1 24 órás Asp. awamori vegetatív tenyészetével oltjuk be. A továbbiakban a tenyésztést a 3. példa szerint végezzük, így 40 000 l/ó/l aktivitású tenyészetet kapunk. 5. példa A 2. példa szerinti eljárást ismételjük meg, az ott alkalmazott répadara mennyiséget 0,5, 1,0, 2,0 és 4,0% répadarával helyettesítve. A fermentáció végén 1800, 12 500, 19 038 illetve 79 900 1/h/l aktivitású tenyészleveket kapunk. 6. példa 800 1 csapvízben elkészített tápközeget (darált, szárított répaszelet, 3,5% (NH^SC^ 0,6%; MgS04 0,05%; KH2P04 0,01%; MnS04 0,005%; ZnS04 0,001%; Co(N03)2 0,005%; malátakivonat 0,15%; kukoricalekvár 1%) 120 °C-on 50 percig sterilezünk. A 28 °C-ra lehűtött táptalajt 80124 órás Aspergillus awamori vegetatív tenyészetével oltjuk be. A fermentáció során alkalmazott keverési sebesség 230 fordulat/perc. A tenyészeten percenként egy táptalajtérfogatnak megfelelő levegőt áramoltatunk át. Az oldott oxigén-koncentráció 43 mmol/l/h, a fermentorban levő nyomás pedig 0,4 att. A 72 órás, 30 °C-on történt tenyésztés után a micéliumot szűrőcentrifugával választjuk el a 90 990 1/h/l aktivitású fermentlétől. A fermentlevet ezután filmbepárló készülékben 36 °C-on bepároljuk. A sűrítmény aktivitása 353 9001/h/l, a kitermelés 95%. A sűrítmény egy részéből (40 1), +5 °C hőmérsékleten, keverővei ellátott tartályban négyszeres mennyiségű metilalkohollal kicsapjuk az enzimet, ezután néhány órán át ülepedni hagyjuk. A csapadékot keretes szűrőprésen leszűrjük, majd abszolút alkohollal szárítjuk. A kapott enzim mennyisége 1,9 kg. Az enzimpor aktivitása 5456 1/h/g. A kitermelés 73%. 7. példa 800 1 4%-os refrakciójú répakivonat (amely 0,8% (NH4)2S04-ot; 0,50% MgS04-ot; 0,01% KH2P04-ot; 0,001% MnS04-ot; 0,001% ZnS04-ot; 0,001% Co(N03)2-ot; 1% kukoricalekvárt és 0,02% szilikonolajat tartalmaz), pH-ja sterilezés előtt 4,5 ; a sterilezést 120 °C-on 50 percig végezzük. A 30 °C-ra lehűtött táptalajt 80 1 24 órás vegetatív Aspergillus awamori tenyészettel oltjuk be. A tenyésztést 30 °C-on hajtjuk végre, percenként 8001 levegő átfúvatással, 230 fordulat/perc keverési sebességgel. A nyomás 0,5 att, az oxigénellátottság pedig 45 mmol/l/h. A 74 órás fermentáció végén a micéliumot szűrőpréssel választjuk el a fermentlétől. A fermentlé aktivitása 100 000 1/h/l. A fermentlevet 37 °C-on bepároljuk 320 0001/h/l aktivitásértékre. A kitermelés 90%. A sűrítmény egyik részéből porlasztva szárító berendezéssel enzimport készítünk (60 °C anyaghőmérséklettel). Az enzimpor aktivitása 2300 1/h/g. A kitermelés 69%. A sűrítmény másik részéből örvénykamrás szárítóberendezéssel 37 °C-on (100 1/h teljesítménnyel) poralakú preparátumot készítünk. A termék granulátumszerű „instant” minőségű. Aktivitása 3000 1/h/g, a kitermelés 98%-os. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás zöldség- és gyümölcslevek, valamint zöldség- és gyümölcspépek előállítása során alkalmazható endopoligalakturonáz tartalmú enzimkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy Aspergillus awamori OKI 00173 mikroorganizmust legalább 0,5 súly% pektint, asszimilálható nitrogénforrást, ásványi sókat és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
