176580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimek és enzimkeverékek rögzítésére kopolimer réteg(ek)ben
9 176580 10 polimer 5 sn/o-os oldatából 0,5 cm:!-t adunk. A homogenizált rendszerhez fokozatosan — állandó keverés mellett — további 10 cm3 kopolimer oldatot mérünk. Az elegyet 50 cm2 felületű sima polisztirol lapra öntjük és szárítószekrényben 35 °-on megszárítjuk. A film nedvességtartalma a szárítás után 12%. Az így előkészített film mindkét oldalára szórással 3 cm3 kopolimer oldatot viszünk fel, majd az így előállított társított rendszert levegőn megszárítjuk. Enzimaktivitásra számított kitermelés : 52% 10. példa Ureáz enzim immobilizálása 32% vinilbutirát —68%vinilalkohol összetételű kopolimer membránban. 0,1 g ureáz enzimből (Merck termék) 0,4 cm3 víz fokozatos hozzáadásával tömény szuszpenziót állítunk elő. A kopolimerből melegen 20 s%-os oldatot készítünk. A tömény enzim-szuszpenziót 50 cm3 kopolimer oldattal elegyítjük, majd a rendszerhez 1 cm3 0,8 s% szukcindialdehidet és 0,1 g bróm-timolkék indikátort tartalmazó vizes oldatot adunk. A homogenizált elegyből plexi lemezen filmet öntünk és levegőáramban beszárítjuk. Enzimaktivitásra számított kitermelés: 78%. Az így előállított rendszer lehetővé teszi karbamid kimutatását, illetve nagy pontosságú mennyiségi meghatározását kis minta térfogatok esetén is. A filmbe kerülő karbamidot ugyanis az ureáz enzim elbontja és a keletkező ammónia hatására vizes közegben az indikátor színe megváltozik. 11. példa Aktív kolineszteráz enzimet tartalmazó, környezetvédelmi analitikai célokra felhasználható készítmények előállítása. Nagy aktivitású kolineszteráz enzimből desztillált vízben való oldással 0,01 mg/cm3 koncentrációjú oldatot állítunk elő. Az enzim oldatot és az 1% vinilbenziléter—99% vinilalkohol összetételű kopolimer 2 s%-os oldatát 1:1 térfogatarányban elegyítjük, majd az elegyhez bróm-timolkék indikátort adunk. Homogenizálás után az oldatból filmeket öntünk. Enzinmaktivitásra vonatkoztatott kitermelés : 22%. A filmek előnyösen alkalmazhatók a növényvédőszerekből visszamaradó, egészségre káros anyagok (pl. szerves foszforsav-észterek) kimutatására és mennyiségi meghatározására. A rendszert az enzim szubsztrátját tartalmazó oldattal érintkezésbe hozva ugyanis az indikátor színe megváltozik, s a színváltozáshoz szükséges idő arányos a membránban foglalt enzim aktivitásával. 12. példa Glükózoxidáz és peroxidáz enzimeket tartalmazó többrétegű, társított rendszerek kialakítása 2% vinilformiát—98% vinilalkohol összetételű kopolimerből. A kopolimerből 5 s%-os vizes oldatot készítünk, majd 10—10 cm3 oldatból 50 cm2 felületű — azonos alakú — polisztirol lemezeken filmeket öntünk és azokat beszárítjuk. A glükózoxidáz, illetve a peroxidáz enzimekből (Merck termékek) 0,5 cm3 térfogatú és 0,05 g/cm3 töménységű vizes oldatokat állítunk elő, majd az enzimoldatok teljes mennyiségét 0,5—0,5 cm3 10 s%-os kopolimer oldattal homogenizáljuk. A kopolimerből készített filmeket vízben néhány percig előduzzasztjuk, majd az egyik duzzadt kopolimer filmet a glükózoxidáz és a kopolimer közös oldatával egyenletesen bevonjuk, és erre — gondosan ügyelve, hogy a filmek között levegőbuborék ne maradjon — egy másik kopolimer filmet illesztünk. Az így kialakított rendszer felhasználásával az eljárást a peroxidáz tartalmú kopolimer oldattal az előzőekhez teljesen hasonló módon megismételjük. A szárítás vízszintes helyzetben, enyhe kifeszítés mellett, szobahőmérsékleten, levegőáramban történik. Enzimaktivitásra vonatkoztatott kitermelés : glükózoxidázra : 56%, peroxidázra: 48%. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás vízben oldható vagy vizes közegben diszpregálható enzimek és enzim keverékek rögzítésére kopolimer réteg(ek)ben azzal jellemezve, hogy a) vinilalkohol—viniléter vagy vinilalkohol— vinilészter vagy vinilalkohol—vinildiacetát típusú, — 0,25—50,0 mól% vinilétert, vagy vinilésztert, vagy vinildiacetált tartalmazó — kopolimerből 2,0—20,0 s% mennyiséget 0,001—20,0 s% enzimmel vagy enzimkeverékkel vizes közegben elegyítünk és az oldatból — amely adott esetben még kismolekulájú aldehideket vagy egyéb vízoldható polimert, így karboximetil-cellulózt is tartalmaz — filmet képezünk, ennek egyik vagy mindkét oldalát kopolimer oldattal vonjuk be, ezután a rétegeket szárítjuk, majd adott esetben az így nyert filmre enzimet vagy enzimeket tartalmazó újabb kopolimer réteget vagy rétegeket viszünk fel ; vagy b) az a) eljárásváltozatban felsorolt kopolimerek enzimmentes oldatából beszállítással filmeket készítünk, majd két vagy több filmet a kopolimer és az aktív enzim közös oldatával, amely 2,0—20,0 s% mennyiségű kopolimert és 0.001— 20,0 s% enzimet tartalmaz, összeragasztunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 81.1236.66*42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 5
