176462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolin-származékok előállítására fermentációs úton
13 176462 14 speciális cirkulációs készülékben (amely áll egy hidrogénező edényből, a hidrogénező edényen van adagoló és cirkulációs vezeték, hőmérő, fecskendőnyílás, gáztartály és laboratóriumi vízsugárszivattyú) hidrogénezzük 138,5 h"1 fordulatszám, 120 mm kénsav-oszlopnak megfelelő ejektor-nyomás és 2 mm-es ejektorszelep-átmérő alkalmazásával, 4 óra leforgása alatt. A kapott 9,10-dihidroergotoxin-oldatról leszűrjük a katalizátort, a tiszta szűrletet rotációs vákuum-bepárló segítségével +30 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten szárazra pároljuk, és a kapott maradékot feloldjuk 30 ml kloroformban. A kapott oldathoz 35 ml dietilétert adunk, és erélyes keverés közben 70 ml teh'tett éteres maleinsav-oldattal teljes mértékben leválasztjuk a dihidroergotoxin-dimaleinátot. A terméket leszívatjuk, 30 ml dietiléterrel mossuk és vákuumexszikkátorban azonnal foszforpentoxid fölött szárítjuk. így kapunk 6,55 g (93,5%) vékony rétegkromatográfiai szempontból tiszta, fehér, kristályos dihidroergotoxin-dimaleinátot, amelynek a tisztasági foka 97,9%-os. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás ergolin-származékok, elsősorban az ergotoxin-csoportba tartozó alkaloidák, a 9,10-dihidroalkaloidák és ergometrin, valamint savaddíciós sóik előállítására fermentációs úton, azzal jellemezve, hogy az IMET PA 130 szám alatt deponált Claviceps purpurea (Fr.) Túl. törzs segítségével szaprofitikus körülmények között szilárd vagy folyékony táptalajon 15-25 °C hőmérsékleten konídium-spórákat tenyésztünk, ezekkel a spórákkal szacharózt, szervetlen, nitrogént és egyéb önmagában ismert adalékanyagokat tartalmazó táptalajt oltunk be, a tenyészetet önmagában ismert módon fermentorban tenyésztjük, a tenyésztés befejeztével a) a tenyésztési folyadékot 10% ammónium-szulfát hozzáadása után 8-9 pH-értéknél valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel extraháljuk, az extraktumot valamilyen híg savval extraháljuk és a vizes-savas alkaloidaextraktumot 8—9 pH-értéknél valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel extraháljuk, vagy b) a micélium elválasztása után kapott tenyésztési folyadékot 8-9 pH-értéknél valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel extraháljuk, vagy c) a tenyésztési folyadékot a micélium elválasztása előtt 1 :1 térfogatarányban vízzel hígítjuk, majd a micélium elválasztása után kapott tenyésztési szűrletet 8-9 pH-értéknél valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel vagy metilénkloriddal extraháljuk, majd a b) és c) eljárásváltozat szerint a tenyésztési folyadéktól elválasztott micéliumot acetonnal kimerítő extrakciónak vetjük alá, a kapott extraktumot 2—3 pH-értéknél valamilyen szénhidrogén-keverékkel tisztítjuk és a vizes fázist 8-9 pH-értéknél valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel 5 extraháljuk és a vizes-savas és a szerves extraktumokat egyesítjük, tisztítjuk, koncentráljuk, majd a kapott nyers alkaloida-koncentrátumhoz 1-3-szoros térfogatnyi kloroformot adunk hűtéses tárolás után a kikristályosodott ergometrin-kloroform adduktu- 10 mot izoláljuk és adott esetben ismert módon az ergometrin gyógyászati szempontból megfelelő savaddíciós sóját képezzük, majd az ergometrin leválasztása után kapott extraktumot koncentráljuk, az alkaloida-koncentrátumban levő 15 alkaloidák összes mennyiségére vonatkoztatott 1 : 5-1 : 20 arányban alkalmazott alumíniumoxidon adott esetben aktívszén adagolásával egyidejűleg, amikor is az alumíniumoxid és az aktívszén aránya 5:1, adszorpcióval vagy adszorpciós kromatográfiá- 20 val tisztítjuk, valamilyen karbonsav-rövidszénláncú alkilészterrel, halogénezett szénhidrogénnel vagy aromás szénhidrogénnel extraháljuk, illetve eluáljuk és így nagy tisztaságú epimermentes ergotoxin-aromás-adduktumot kapunk, a kapott ergotoxin-bázi- 25 sokat adott esetben Raney-nikkel jelenlétében +50—70 °C hőmérsékleten, 30—70 afm nyomáson dioxánban, illetve 5—10%-os palládiumos aktívszén katalizátor jelenlétében +20-30 °C hőmérsékleten normál nyomáson vizes dioxánban 9,10-dihidrogé- 30 nézzük és adott esetben gyógyászati szempontból megfelelő savaddíciós sóját képezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a konídium-spórákat 35 1 8—24 °C hőmérsékleten tenyésztjük. 3. Az 1. igénypont a) vagy b) eljárásváltozata szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extrakciót etilacetáttal végezzük. 4. Az 1. igénypont c) eljárásváltozata szerinti 40 eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extraktum tisztítását petroléterrel vagy petroléter/xilol elegyével hajtjuk végre. 5. Az 1. igénypont a) eljárásváltozata szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 45 a tenyészfolyadék extrakciója után kapott extraktumot foszforsavval extraháljuk. 6. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az ergotoxin-aromás adduktumot benzollal, toluol-50 lal vagy xiloilal végezzük. 7. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a Raney-nikkel jelenlétében történő hidrogénezést +60 °C hőmérsékleten és 50 atm nyomáson hajtjuk 55 végre. 8. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a palládiumos aktívszén jelenlétében történő hidrogénezést 25 °C hőmérsékleten hajtjuk végre. A kiadáséit felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 814158 - Zrínyi Nyomda, Budapest 7
