176307. lajstromszámú szabadalom • Eljárás juh adenovírus által okozott betegségek elleni védekezésre használható inaktivált bivalens vakcina előállítására
5 176307 6 sejttenyészeten szaporítunk. Tápfolyadékként 10% foetal borjúsavót tartalmazó Hanks-oldatot, fenntartóként Earle-oldatot használunk. A tenyésztést a továbbiakban az 1. példa szerinti módon folytatjuk azzal az eltéréssel, hogy adjuvánsként az alumíniumhidroxid-gél mellett 1 mg/ml szaponint is adunk a tenyészethez. Az inaktiválást ß-propiolaktonnal végezzük. A fentiek szerint előállított oltóanyaggal kísérleteket végeztünk az ártalmatlanság és a hatékonyság megállapítása végett. Az ártalmatlanságot úgy vizsgáltuk, hogy vemhes anyajuhokat, szopós bárányokat és hízóbárányokat ötszörös adaggal (előnyösen 10 ml) oltottuk be. A vakcinázott állatokat egy hónapig tartottuk megfigyelés alatt. Ezalatt semmiféle klinikai tünetet nem tapasztaltunk. A hatékonyságot az alábbiak szerint vizsgáltuk. 20 db szeronegatív választott bárányt egyszeri beoltással vakcináztunk. Az oltás napján, valamint a 8., 14., 21., 42. és 56. napon vett vérmintákban ellenőriztük a víros-semlegesítő anyagok megjelenését. Már a 8. napon vett mintákban mutattunk ki ellenanyagokat, melyek titere a 21. nap körül érte el a maximális 1 : 16 — 1 :48 értéket. Ezután az ellenanyag titere fokozatosan csökkent az 56. napig, amikoris átlagban 1 :4 értéket ért el. További kísérleteinkben a kétszeri vakcinázás hatását vizsgáltuk. Azt találtuk, hogy a második oltás időpontja lényegesen befolyásolja a vakcinázás hatékonyságát. Az első oltást követő 10., 21. és 42. napon 20-20 állatot vakcináztunk újból. Az első csoportban (második oltás a 10. napon) a 30. napon 1 : 512 - 1 : 1024 titerü ellenanyagokat mutattunk ki. A második csoportban (második oltás a 21. napon) nem észleltünk számottevő ellenanyag-titer emelkedést a második vak cinázást követően. A harmadik csoportban (második oltás a 42. napon) a 65. napon 1 : 192 — 1 : 384 titerü ellenanyagokat mutattunk ki. Az ellenanyagok titere még a kísérletet lezáró 110. napon is 1 : 64 volt. A kontrollcsoportokban az elvégzett vizsgálatok valamennyi kísérlet esetén negatív eredményt adtak. 5 A kontrollcsoporthoz tartozó bárányokban specifikus ellenanyagokat egyetlen esetben sem mutattunk ki. Amint a fenti kísérletek eredményei mutatják, a találmány szerinti eljárással előállított oltóanyaggal 10 kétszer kell vakcinázni. Fertőzött környezetbe került állatoknál az oltást a 10. napon, vemhes anyajuhok esetében a 6. héten ajánlatos megismételni. A találmány szerinti eljárással előállított vakcinát nagyüzemekben is kipróbáltuk. A rendszeres vakciná- 15 zás meggátolta a korábban többször is előforduló járványok kialakulását. A vakcinázás eredményeként a bárányok elhullása 12-15%-ról 6'7 alá csökkent. A hízóbárányok súlygyarapodása havonta 1,2 — 1,8 kg-mal emelkedett. Ez utóbbi eredmény annak tulaj- 20 donítható, hogy a vakcinázott hízóbárányokat a betegség még enyhe formájában sem érte. Szabadalmi igénypontok 25 1. Eljárás juh adenovirus által okozott betegségek elleni védekezésre használható inaktivált bivalens vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy a 00174, illetve 00175 számon letétbe helyezett adenovirus 30 törzset bárányvese-sejteken szaporítjuk, célszerűen a szövet teljes széteséséig, az így kapott vírusfolyadékot egy ismert adjuvánssal, előnyösen alumíniumhidroxidgéllel alaposan összekeverjük, majd egy ismert inaktiválószerrel, előnyösen formaldehiddel vagy ß-propio- 35 laktonnal inaktiváljuk és az így kapott vakcinához adott esetben egy tartósítószert, előnyösen nátriumazidot adunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a vírusok szaporítását 40 37 °C-os inkubálással 7,2-7,4 pH értéken végezzük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója (81067) MGSZ Nyomda, Budapest - Felelős vezető: Tulipánt József 3
