176294. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigének és antitestek meghatározására
23 176294 24 A VI. táblázatban megadott számértékekből kitűnik, hogy nyilvánvaló összefüggés áll fenn a fibrinogén-koncentráció és az extinkció között, abban az esetben, ha az alkalmazott fény hullámhossza legalább kétszerese a szilárd hordozórészecskék (polisztirol-latex-részecskék) átlagos átmérőjének. 5. példa Az 1. példa (1) pontja szerint eljárva állítunk elő anti-(humán chorion-gonadotropin)-nal érzékenyített latex-reagenst, azzal az eltéréssel, hogy az anti-(humán fibrinogén)-antitest helyett anti-(humán chorin-gonadotropin)-antitestet (anti-hCG) alkalmazunk, és a 0,481 mikrométer átlagos részecskeméretű polisztirol-latex helyett 0,234 mikrométer átlagos részecskeméretű polisztirol-latexet (gyártó Dow Chemical Co.) használunk. Az ilyen módon kapott, anti-(humán chorion-gonadotropin)-nal érzékenyített latex-reagens segítségével meghatározzuk az extinkciót az 1. példa (2) pontjában ismertetett módon, 1,2 mikrométer hullámhosszúságú fény alkalmazásával, csak a standard fibrinogén-oldat helyett standard humán chorion-gonadotropin-oldatot alkalmazunk. A kapott eredményeket a VII. táblázatban mutatjuk be. VII. Táblázat A standard humán chorion-gonadotropin-oldat koncentrációja NE/ml Extinkció 1,2 mikrométernél 0,1 0,048 0,2 0,130 0,3 0,168 0,4 0,261 0,5 0,360 0,7 0,630 1,0 0,972 A kapott számértékek felhasználásával kalibrációs görbét állítunk fel a fentebb ismertetett mó- 25 don. Másrészt, különböző betegektől vizeletmintákat veszünk, amelyeket a vizeletben jelenlevő humán chorion-gonadotropin meghatározásához használunk fel, az 1. példa (3) bekezdésében megadott módon eljárva. A kapott eredményeket a VIII. 30 táblázatban foglaljuk össze. Beteg Ismeretlen minta száma típusa hígítása VIII. Táblázat Mért extinkció Humán chorion-gonadotropin-koncentráció az ismeretlen mintában, NE/ml találmány radioimmunszerinti -vizsgálati eljárás módszer 1. Vizelet XI 0,400 0,564 0,482 2. Vizelet XI 1,122 0,966 1,120 3. Vizelet X 1 0,955 0,944 0,857 4. Vizelet XI 0,990 0,952 0,925 példa 50 IX. Táblázat L-alakú keverőbottal felszerelt, 2 mm széles, üvegből készült abszorpciós küvettába bemérünk 0,1 ml, 2. példa szerint előállított, antiflbrinogénnel érzékenyített latex-reagenst, valamint 0,3 ml standard fibrinogén-oldatot, amelynek a koncentrációja 55 a IX. táblázatban van feltüntetve, és folyamatosan figyeljük a reakcióelegy extinkcióját 1,2 mikrométer hullámhosszúságú fény alkalmazásával az 1. példa (2) pontjában megadott módon. Megfigyeljük azt az időt, amely ahhoz szükséges, hogy az ex- 60 tinkció értéke 0,5 legyen. A meghatározás során a keverőbotot percenként 200-szor függőlegesen felfelé és lefelé mozgatjuk. A különböző koncentrációjú standard fibrinogén-oldatokkal kapott eredményeket a IX. táblázat tartalmazza. 65 A standard fibrinogén- 0,5-ös extinkció-érték -oldat koncentrációja, eléréshez szükséges Mg/ml idő, sec 2 26,9 4 11,3 6 6,4 8 4,7 10 2,9 12
