176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására
13 176260 14 Acilezési reakciók: KI. módszer: 1 mmól megfelelő gliceril-monoésztert 3 mmól piridint tartalmazó 1 ml kloroformban oldunk, és a jéghideg oldathoz 3 mmól acetilkloridot adunk. Az elegyet 18 órán át 20-25 °C-on keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékot etilacetátban oldjuk, és az oldatot egymás után vízzel, telített, vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, végül ismét vízzel mossuk. Az oldatot szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A kapott nyers terméket kevés metanollal eldörzsöljük, majd leszűrjük. A kiindulási anyagként felhasznált gliceril-monoészter-származékokat a következőképpen állítjuk elő: 50 mmól, izopropilidén-védőcsoportot hordozó észter 300 ml 2-metoxi-etanollal készített oldatához 500 mmól bórsavat adunk, és az elegyet 6 órán át vízfürdőn melegítjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és etüacetáttal helyettesítjük. Az oldatot vízzel mossuk, szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékként kapott észtert szüikagél-oszlopon végzett kromatografálással tisztítjuk. K2. módszer: A KI. módszer szerint járunk el, azonban acetilklorid helyett palmitoilkloridot alkalmazunk. K3. módszer: 1 mmól, benzilidén-védőcsoportot tartalmazó gliceril-monoészter és 4 mmól bórsav 5 ml trimetilboráttal készített oldatát 20 percig vízfürdőn melegítjük. A trimetilborátot lepároljuk, és a maradékot további 20 percig vízfürdőn melegítjük. A kapott anyagot 30 ml etilacetátban oldjuk, az oldatot vízzel mossuk, majd bepároljuk. A kapott szabad gliceril-monoésztert a KI. módszernél közöltek szerint acetilkloriddal acilezzük. K4. módszer: A K3. módszer szerint járunk el, azonban acilezőszerként hexanoükloridot alkalmazunk. Észterképzés: Ll. módszer: 10 mmól vízmentes, védett aminosav 10 ml vízmentes piridinnel készített, 0 °C-os oldatához 10 mmól benzolszulfonükloridbt adunk. Az elegyet 15 percig 0°C-on keverjük, majd 10 mmól megfelelő alkoholt adunk hozzá. A reakcióelegyet 18 órán át 4 °C-on keverjük, majd a piridint vákuumban lepároljuk. A maradékot 150 ml etilacetátban oldjuk. Az oldatot egymás után vízzel, 1 n vizes sósavoldattal, vízzel, 2 n vizes kálium-hidrogénkarbonát-oldattal, végül ismét vízzel mossuk, szárítjuk, majd bepároljuk. Nyers terméket kapunk. L2. módszer: 5 mmól védett aminosav 5 ml piridinnel készített, 0 °C-os oldatához keverés közben 10 mmól fenolt és 10 mmól N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk, és az elegyet 18 órán át 4 °C-on keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, és a piridint vákuumban lepároljuk. A maradékot 100 ml etilacetátban oldjuk, és az oldatot egymás után vízzel, 2 n vizes kálium-hidrogénkarbonát-oldattal, majd ismét vízzel mossuk. Az oldatot szárítjuk és bepároljuk. Nyers terméket kapunk. L3, módszer: 10 mmól aminosav acetonitrillel készített, 0°C-os oldatához 10 mmól alkoholt és 20 mmól piridint adunk. Az elegyhez 11 mmol N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 18 órán át 4 °C-on keverjük, majd szűrjük, végül vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban felvesszük. Az oldatot egymás után vizes citromsav-oldattal, vizes kálium-hidrogénkarbonát-oldatt'al, végül vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. Nyers terméket kapunk. L4. módszer: Az L3. módszer szerint járunk el, azonban reakcióközegként acetonitril helyett acetont alkalmazunk. Ammóniás reakciók: Ml. módszer: A megfelelő peptid-metilésztert minimális mennyiségű dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz fölöslegben vett, tömény etanolos ammónia-oldatot adunk, és az elegyet 3 napon át 20-r25 °C-on tartjuk. A terméket vízzel csapjuk ki. Hidrazinos reakciók: NI. módszer: 10 mmól peptid-metilésztert 25 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldathoz 50 mmól 60%-os vizes hidrazinhidrát-oldatot adunk. Az elegyet 18 órán át 20-25 °C-on keverjük, adott esetben vákuumban eredeti térfogatának felére bepároljuk, és a terméket vízzel kicsapjuk. Egyéb reakciók: Pl. módszer: 729 mg (1 mmól) Boc-Tyr(Bu*)—D—Ala—Gly—Phe—Leu—OH (161. sz. kiindulási anyag), 0,55 ml (7 mmól) tiszta, vízmentes piridin és 0,9 ml (6,7 mmól) frissen desztülált ecetsavanhidrid elegyét 10 percig 20-22 °C-on keverjük. A kapott oldatot 6 órán át 90—92 °C-on tartjuk, majd lehűtjük és 15 ml vízzel elegyítjük. A kivált gumiszerű anyagról leöntjük a folyadékfázist, majd ötször 15 ml vízzel mossuk dekantálás közben. Ezután a gumiszerű anyagot 50 ml etilacetátban oldjuk, és az oldatot egymás után négyszer 10 ml 10 vegyes %-os vizes citromsav-oldattal, egyszer 5 ml vízzel, háromszor 10 ml 10 vegyes %-os vizes kálium-hidrogénkarbonát-oldattal és háromszor 10 ml vízzel mossuk. Az oldatot vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. 530 mg szilárd maradékot kapunk, amely NMR-spektrum alapján a Boc—TyrjBu*)—D—Alá—Gly-Phe-NH-CH - COCH3 I I Ac Ölj—CHMej képletű peptid L, D, L, L és L, D, L, D izomerjének elegye. Rf: 0,73 (D. rendszer), 0,64 (J. rendszer), 0,21 (P. rendszer), 0,47 (GL rendszer). Ql. módszer: 55,2 g (100 mmól) Z-TyríBu*)-OH-diciklohexilaminsóból felszabadítjuk a savat. A szabad savat 300 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldjuk, és az oldathoz 50 ml (800 mmól) metiljodidot adunk. Az elegyhez 8,6 g 80súly%-os ásványolajos nátriumhidrid-díszperziót (azaz 300 mmól nátriumhidridet) adunk, és 18 órán át 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
