176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására
53 176260 54 18. táblázat folytatása Példa Termék száma A B C Rf-VlO2 D E H K Kiind. anyag 0l száma Módszer Megjegyzés 63. H-Lys-Tyr-D-Ala-Gly—Phe—Met—OMe 33 54 30 51 213. E8. 2, 6, 23 64. H-Lys-Tyr—Azala-Gly—Phe—Leu—OMe 35 69 21 45 14 42 214. E8. 2, 4, 24 65. H—Lys—Tyr—D-Ser-Gly— —Phe-Azleu—NH2 38 61 28 50 68 215. E8. 2,4 66. H—Lys—Tyr—D—Ser—Gly— —Phe—Met—OMe 33 54 30 55 216. E8. 2, 5 67. H—Phe H—Lys—Tyr—D—Ala— —Gly—Phe—Leu—OMe 60 208. E3. 2, 8 68. H—Gly—Gly—Gly—Me—Tyr— —D-Ser-Gly—Phe—Leu—OMe 37 73 25 48 55 205. E10. 1, H 69. H-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Tyr—D—Ala-Gly—Phe —Leu—OMe 31 75 4 13 41 204. E4. 1,4 70—88. példa A kiindulási anyagként felhasznált védett polipeptidet trifluorecetsawal kezeljük. A 19. táblázatban felsorolt (I) általános képletű vegyületeket kapjuk. A védőcsoportokat a következő módszerekkel hasítjuk le: FI. módszer: A kiindulási anyagot trifluorecetsavban oldjuk (10 ml trifluorecetsavat használunk fel 1 g kiindulási anyagra vonatkoztatva), és az elegyet 1—2 órán át 20-25 °C-on tartjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk. A terméket trifluorecetsavas sója formájában kapjuk. Adott esetben a terméket kis fölöslegben vett sósav jelenlétében fagyasztva szárítjuk. Ekkor az (I) általános képletű vegyületet hidrokloridja formájában kapjuk. F2. módszer: Az FI. módszer szerint járunk el, azonban 90 vagy 95 térfogat %-os vizes trifluorecetsavat alkalmazunk. F3. módszer: Az FI. módszer szerint járunk el, azonban 90 vagy 95 térfogat %-os vizes trifluorecetsavat használunk fel, és a reakciót nitrogén-atmoszférában, hasítószer (például 2-merkapto-etanol) jelenlétében végezzük. Megjegyzések a 19. táblázathoz: 1. Sósavas só. 2. Ecetsavas só. 3. Trifluorecetsavas só. 4. Bisz-trifluoracetát. 5. Az oldatot diatómaföldön keresztül szüljük, majd a terméket kicsapjuk a szűrletből. 6. A terméket petroléterrel kicsapjuk. 35 7. A terméket liofílizáljuk (közeg: víz vagy víz és terc-butanol 50 :50 térfogatarányú elegye). 8. Lásd a 7. megjegyzést, a műveletet sósav jelenlétében végezzük. 9. A terméket Sephadex G15 gélen kromatogra- 40 fáljuk, oldószerként 5 térfogat %-os vizes ecetsavat használunk. 10. Op.: 150-155 °C. 11. Op.: 166-168 °C. 45 89. példa 50 235 g (330 jumól) H-Tyr-D-Ser-Gly-Phe(6H)-Leu-OMe (110. sz. kiindulási anyag) 5 ml metanollal készített oldatához 1,0 ml (3 mólekvivalens) 55 vizes nátriumhídroxid-oldatot (In) adunk, és az elegyet 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot vízzel hígítjuk, híg, vizes sósavoldattal megsavanyítjuk, majd szűrjük. A szűrletet fagyasztva szárítjuk. A 50 kapott terméket sómentesítés céljából 5%-os vizes ecetsav-oldatban Sephadex G15 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át, majd a szűrletet fagyasztva szárítjuk. Termékként H—Tyr—D—Ser—Gly— -Phe(6H)—Leu—OH-t kapunk, R*: 0,38 (C. rend- 65 szer). 27
