176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására

49

176260

50

17. táblázat folytatása

Pél-RfXlO2

Kiind.

Mód«Megda

Termék

anyag

szer

jegyszáma A

B

C

D F H

K a száma

zés

40.

H—Lys-Gly-Gly-Gly-Tyr—D—

—Ala-Gly-Phe-Leu—OMe 32

72

4

9 188.

H9.

2, 16

41.

H-Gly-Gly—Gly H-Lys-Tyr—D—Alá—Gly—Phe-Leu-OMe 28

66

25

42

195.

H9.

2, 16, 13

42.

H—Arg—Pro—Lys—Pro-Gln— -Gln-Tyr—D—Alá—Gly-198.

H9.

18,19-Phe-Leu-OMe

43-69. példa 20

A kiindulási anyagként felhasznált védett polipeptidet sósavval kezeljük. A 18. táblázatban felsorolt (I) általános képletű vegyületeket kapjuk.

A védőcsoportckat a következő módszerekkel 25 hasítjuk le:

El. módszer: A kiindulási anyagot etilacetátban oldjuk, és az oldathoz etilacetátos sósavoldatot adunk. Az elegy sósavkoncentrációját 2—6 n 30 értékre állítjuk be. Az elegyet 1—2 órán át 20—25 °C-on állni hagyjuk. A nem kívánt mellékreakciók kiküszöbölése érdekében a lehető legrövidebb reakcióidőt alkalmazzuk. A termék hidrokloridja rendszerint szilárd anyag formájában válik ki 35 az oldatból. Ekkor a szilárd anyagot szűréssel különítjük el, egyéb esetekben a terméket az oldat vákuumbepárlásával izoláljuk.

E2. módszer: Az- El. módszer szerint járunk el, 40 azonban reakcióközegként metanolt alkalmazunk.

E3. módszer: Az El. módszer szerint járunk el, azonban reakcióközegként 50 :50 térfogatarányú metanol-etilacetát elegyet alkalmazunk. 45

E4. módszer: Az El. módszer szerint járunk el, azonban a kiindulási anyagot ecetsavban oldjuk, majd az oldathoz etilacetátos sósavoldatot adunk.

A végső reakcióelegy az ecetsavat és az etilacetátot so 1 :4 térfogatarányban tartalmazza.

E5. módszer: Az E2. módszer szerint járunk el, azonban a reakciót nitrogén-atmoszférában, hasítószer (például 2-merkapto-etanol) jelenlétében végezzük- 55

E6. módszer: Az El. módszer szerint járunk: el, azonban reakcióközegként dietilétert alkalmazunk.

E7. módszer: Az El. módszer szerint járunk el, azonban reakcióközegként dioxánt alkalmazunk.

E8. módszer: Az El. módszer szerint járunk el, so azonban reakcióközegként ecetsavat alkalmazunk.

E9. módszer: Az El. módszer szerint járunk el, azonban a reakciót nitrogén-atmoszférában, hasítószer (például 2-merkapto-etanol) jelenlétében végezzük. 65

E10. módszer: A védett polipeptidet körülbelül 10ml/g tömény, vizes sósavoldatban 10 percig 0 °C-on keverjük. A sav fölöslegét vákuumban lepároljuk (a lehető legalacsonyabb hőmérsékletet alkalmazzuk), majd a terméket liofílizáljuk.

Megjegyzések a 18. táblázathoz:

1. Sósavas só.

2. Dihidroklorid-só.

3. Az elegyet diatómaföldön szüljük, majd bepároljuk, és így különítjük el a terméket.

4. A terméket kicsapással különítjük el.

5. A terméket éterrel kicsapjuk.

6. A terméket metanol-éterrel kicsapjuk.

7. A terméket etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60-80 °C) 50 :50 térfogatarányú elegyéből kristályosítjuk.

8. A terméket liofílizáljuk (közeg: víz vagy víz és terc-butanol 50 :50 térfogatarányú elegye).

9. Lásd a 8. megjegyzést, a műveletet sósav jelenlétében végezzük.

10. A terméket szilikagélen kromatografáljuk, oldószerként Q rendszert használunk.

11. Lásd a 10. megjegyzést, oldószerként K rendszert használunk.

12. A terméket Sephadex G15 gélen kronatografáljuk, oldószerként 0,01 mólos vizes sósavoldatot használunk.

13. A terméket Sephadex G25 gélen kromatografáljuk, oldószerként 5 térfogat %-os vizes ecetsav-oldatot használunk.

14. Op.: 202-205 °C.

15. Op.: 110°C.

16. Op.: 179-180 °C.

17. Op.: 173-174 °C.

18. Op.: 142-144 °C.

19. Op.: 118-120 °C.

20. Op.: 138-140 °C.

21. Op.: 111-114 °C.

22. Op.: 195-200 °C (bomlás).

23. Op.: 120-122 °C.

24. Op.: 174-176 X (bomlás).

25. Op.: 120-124 °C.

25