176164. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta4,15-szteroidok előállítására
5 175164 6 Ha tercier aminokként piridint és 4-(dimetil-amino)-piridint alkalmazunk együttesen, akkor az észterezés szobahőmérsékleten végezhető. A 3-helyzetű oxo-védőcsoport lehasítását, amely az esetleges észterezés előtt vagy után is történhet, szakember által ismertetett módszerekkel végezzük. A ketál-hasításhoz ásványi savak, például perklórsav, kénsav vagy sósav, vagy szerves savak, például oxálsav jönnek számításba. A ketál-hasítást előnyösen alkoholos oldatban vagy más poláros oldószerekben, például acetonban 20 és 100 °C közötti hőmérsékleten végezzük. A redukció önmagukban ismert módszerekkel, egy fémhidriddel végzett hidrálással történhet. Hidrogén-donorként különösen komplex hidridek, például nátrium-borohidrid és lítium-tri-(terc-butoxi)-alumínium-hidrid váltak be. A nátrium-borohidriddel történő redukciót előnyösen vizes alkoholos oldatban, a lítium-tri-(terc-butoxi)-alumínium-hidriddel történő redukciót éteres oldatban végezzük. A szén-szén kettőskötések egyidejű redukciójának elkerülése céljából enyhe reakciókörülményeket alkalmazunk, azaz a redukciót körülbelül 0 és 50 °C közötti hőmérsékleten végezzük. A 3-helyzetű hidroxilcsoport észterezésére egy savanhidriddel vagy savhalogeniddel valamilyen tercier amin, például piridin, kollidin vagy trietil-amin jelenlétében szobahőmérsékleten végzett reakció említendő. A 3-helyzetű hidroxilcsoport a savanhidriddel egy erős sav, például p-toluol-szulfonsav alkalmazásával, vagy a megfelelő savval és trifluor-ecetsav-anhidriddel is észterezhető szobahőmérsékleten. A savas katalizátor jelenlétében szobahőmérsékleten vagy a bázikus katalizátor jelenlétében 20— —200 °C közötti hőmérsékleten végzett észterezés során a 3- és 17-helyzetű hidroxil-csoportok egyidejűleg is észteresíthetők. A 3-oxovegyületek hidroxil-amin-sóval 3-oximmá történő átalakítását valamilyen bázis jelenlétében végezzük. Bázisként például piridin, kollidin vagy nátrium-hidrogén-karbonát, nátrium-karbonát, nátrium-acetát és nátrium-hidroxid vizes-alkoholos oldatban a megfelelő". Hidroxil-amin-sókként a hidroklorid vagy a hidrogén-szulfát az előnyösek. A reakciót körülbelül 20 és 150 °C közötti hőmérsékleten végezzük. A 3-oxim a szokásos módszerekkel éterré alakítható. A 3-bximnak egy alkil- vagy cikloalkilcsoporttal képzett éterré történő átalakítását előnyösen a megfelelő alkil- vagy cikloalkil-halogeniddel valamilyen erős bázis, például nátrium-hidroxid jelenlétében, egy poláros oldószerben, például hexametil-foszforsav-triamidban 0—30 °C közötti hőmérsékleten, vagy valamilyen erős bázis, például nátríum-hidrid jelenlétében valamilyen éter, például tetrahidro-furán, vagy egy poláros oldószer, például dimetil-szulfoxid alkalmazásával 30—100 °C-on végezzük. A 3-oxim éterré történő átalakítása valamilyen diazo-alkánnal, különösen diazo-metánnal is lehetséges. A kündulási vegyületekként szükséges II általános képletű 17-oxo-szteroidok előállítását az alábbi példák során újuk le. A. 15a-Hidroxi-l 8-metil4-ösztrén-3,l 7-dion. Egy 2 literes Erlenmeyer-lombikot, amely 500 ml 120°C-on 30 percig sterilezett, 3,0% glükózt, 1,0% kukoricalekvárt, 0,2% nátrium-nitrátot, 0,1% kálium-dihidrogénfoszfátot, 0,2% dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,002% vas-II-szulfátot és 0,05% kálium-kloridot tartalmazó tápoldattal van töltve, beoltunk Pénicillium raistrickii (ATCC 10 490) liofílizált kultúrájával, és 72 órát + 30 °C-on rázóasztalon rázatjuk. Ennek az inokulumnak 250 ml-ével beoltunk utána egy 20 literes üvegfermentort, amely 15 liter ugyanolyan összetételű, 121 °C-on és 1,1 atü nyomáson sterilizált tápoldattal van töltve. Habzásgátlóként Silicon SH-t adunk hozzá, és 29 °C-on 10 liter/perc 0,7 atü nyomású levegőztetéssel 220 fordulaf/perc keverés közben 24 órát fermentáljuk. A tenyészet 1,8 literét steril körülmények között átvisszük 26 liter, az inokulummal azonos összetételű és a fentiekhez hasonlóan sterilizált tápoldatba, és az előfermentum-tenyészethez hasonló körülmények között fermentáljuk. 12 óra múlva hozzáadunk 2 liter sterilizált folyadékot, amely desztillált vkben 120 g 18-metil-4-ösztrén-3,17-dion vizes Tween® 80 jelenlétében finoman eloszlatott szuszpenziójából áll, és tovább fermentáljuk. A folyamatot a fermentorminták metil-izobutil-ketonos extraktumainak vékonyrétegkromatográfiás analízisével követjük. Körülbelül 70 óra múlva az átalakulás teljessé válik. Ekkor a gombamicéliumot kiszűrjük, és a^ fermentlevet kétszer 20—20 liter metil-izobutil-ketonnal extraháljuk. Ezzel párhuzamosan a kiszűrt micéliumot metil-izobutil-keton, aceton és víz keverékével többször intenzíven kevertetjük, és addig extraháljuk, amíg nem mutatható ki már szteroid. A szerves extraktumokat egyesítjük, és vákuumban 50 °C fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk. A barna kristályos maradékot a szilikonolaj eltávolítása céljából többször mossuk hexánnal, megszárítjuk, és végül A—szénnel való kezelés után etilacetátból átkristályosítjuk. így 97,3 g (az elméleti 76,5%-a) 175—177 °C olvadáspontú tiszta 15a-hidroxi-18-metil-4-ösztrén-3,l7-diont kapunk. B. 15a-Hidroxi-18-metil-3,3-(2/2’-dimetil-1 ,’3’-propilén-dioxi)-5- és -5(10)-ösztrén-17-on. 20 g 15a-hidroxi-18-metil-4-ösztrén-3,17-diont 150 ml diklór-metán és 40 ml trietil-ortoformiát elegyében 60 g 2,2-dimetíl-l,3-propándioIlal és 200 mg p-toluol-szulfonsawal 20 órán át kevertetünk szobahőmérsékleten. Az oldatot etilacetáttal hígítjuk, nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal semlegesítjük, vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket szilikagélen aceton-hexán gradienssel (0—20% aceton) eluálva kromatografáljuk. 20% acetont tartalmazó eluálószerrel 10,0 g 206—209 °C olvadáspontú 15 a-hi d r o xi-3,3 -{2’2’-dimetil-1 ’3 ’-propiléndioxi)-18- -metil-5-ösztrén-17-ont oldunk le. Továbbá 15 g olajat kapunk, amely 15a4üdroxi-18-metil-3,3-(252’-dimetil-l’>3’-propiléndioxi)- -5-ösztrén-17-on és 15a-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
