176133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és szer az MB-kreotinkináz aktivitásának meghatározására testfolyadék- mintákban
176133 14 13 ció-értékeket. Hullámhossz: 334, 340 vagy 366 nm; rétegvastagság: 1 cm. b2) Az eredmény kiszámítása A kapott percenkénti extinkció-különbségekből (Extinkciókülönbség/perc) átlagértéket képezünk és ezt behelyettesítjük a megfelelő számítási képletbe : mérés 334nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= Extinkciókülönbség/perc x 7000 E/l mérés 340nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= Extinkciókülönbség/perc X 6752 E/l mérés 366nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= Extinkciókülönbség/perc x 12 728 E/l. 4. példa A kreatinkináz-összaktivitás és MB-kreatinkináz-aktivitás egyidejű meghatározása a) A vizsgálati reagens-csomag összetétele A vizsgálati csomag összetétele megegyezik a 2a) példában megadottal. b) A kreatinkináz-összaktivitás és az MB-kreatinkináz-aktivitás meghatározása MB kreatinkinázban bx) A vizsgálat kiviteli módja A koenzimet, enzimet és szubsztrátumot tartalmazó palackba pipettával bemérünk 2,0 ml pufferoldatot és 0,1 ml szérumot illetőleg hígított szérumot. A palack tartalmát összekeverjük, 25 °C hőmérsékleten 5 percig inkubáljuk, majd egy küvettába öntjük és 25 °C hőmérsékleten 2 perc eltelte után mérjük az extinkció-változást (AEvl). Ezután 0,1 ml antitest-oldatot adunk hozzá, azonnal összekeverjük és további 3 perc eltelte után mérjük 25 °C hőmérsékleten az extinkció-változást (AEv2). Hullámhossz: 334, 340 vagy 366nm; rétegvastagság: 1 cm. b2) Az eredmény kiszámítása A kreatinkináz-összaktivitás számítása a következő képletek alapján történik : mérés 334 nm-nél: kreatinkináz-össz-volumenaktivitás= AEvl/perc x 3500 E/l mérés 340 nm-nél: kreatinkináz-össz-volumenaktivitás— AEvl/perc x 3376 E/l mérés 366 nm-nél: kreatinkináz-össz-volumenaktivitás = AEvl /perc x 6364 E/l Az MB-kreatinkináz-aktivitás számítása az alábbi képletek alapján történik : mérés 334 nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= AEv2/perc x 7350 E/l mérés 340 nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= AEv2/perc x 7090 E/l mérés 366 nm-nél: MB-kreatinkináz-volumenaktivitás= AEv2/perc x 13 364 E/l. Az MB-kreatinkináz-aktivitás meghatározása szívinfarktusos és szívinfarktus nélküli pácienseknél, a 3. példa szerinti vizsgálati reagens-csomaggal. a) Kreatinkináz-aktivitás különböző páciens-csoportoknál 5. példa Esetek száma Átlagértékek össz-kreatinkináz(E/l) MB-kreatinkináz (E/l) Páciensek megnövekedett kreatinkináz-aktivitással, szívinfarktus nélkül 48 480 <1,7 Páciensek szívinfarktussal 5 510 44 A fenti táblázat mutatja, hogy a találmány szerinti meghatározási módszerrel gyorsan és egyszerű módon lehet a szívinfarktus jelenlétére következtetni. b) Az MB-kreatinkináz-aktivitás időbeli alakulása egy szívinfarktusos páciensnél Órák a szív-infarktus bekövetkezése után MB-kreatinkináz E/l 3,5 <5 4,5 <5 5,5 6 7,5 22 8,5 23 9,5 29 10,5 50 11,5 46 13,5 56 15,5 55 17,5 64 21,5 62 25,5 50 29,5 42 33,5 25 43,5 18 53,5 <5 61,5 <5 A fenti táblázatban megadott számértékek mutatják a szívinfarktusos páciens esetében az MB-kreatinkináz-aktivitás e találmány szerinti eljárással meghatározott értékeinek időbeli emelkedését, majd újbóli csökkenését. Az alábbi példák a találmány szerinti eljárásban alkalmazott kiindulási anyagok előállítási módját szemléltetik. A) MM-kreatinkináz előállítása a) 1,2 kg mélyhűtött emberi vázizmot szobahőmérsékletre engedünk felmelegedni, majd gépi úton felaprítjuk. Az így kapott felaprított szövetet 2,5 liter hideg 0,05 mólos, 8,0 pH-értékű trisz-(hidroxi-metil)-amino-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
