176075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új guanilhidrazon-származékok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 176075 10 Ezután a sejteket megszámláltuk (10 mezőny/5 lap), és a kapott eredményeket összehasonlítottuk a kezeletlen kontrolioknál észleltekkel. A vizsgált vegyületek közül a 6. és 12. példa szerint előállított termék 10 4 mól/liter koncentrációban a 5 kontrolihoz viszonyítva 77%-kaI, illetve 100%-kal gátolta a sejtnövekedést. B2) Kiültetett tenyészeteken végzett vizsgálatok 10 A vizsgálatokat legalább 6 hónapon át tenyésztett patkányembrió-tenyészeteken (izomfragmens) végeztük. A kiültetett embriót plazmakoagulum-közegbe (tyúkplazma) helyeztük, és a tenyészethez táptalajként Hanx-közeg, embrió-extraktum és komplementum- 15 mentes borjúembrió-szérum elegyét adtuk. 24 órával a plazmakoagulumba helyezés után a tenyészethez különböző koncentrációjú oldatok formájában hozzáadtuk a vizsgálandó vegyületeket. 4 nap elteltével a tenyészeteket megvizsgáltuk, és a kiültetett embrió növekedési 20 zónájában megszámláltuk a mitózisokat. Az egyes mitózis-fázisok előfordulási gyakoriságát a teljes mitózisszámhoz viszonyítva kiszámítottuk az adott fázisokra vonatkozó mitózis-indexeket. A meta-fázis mitózis-indexe a kontroli-tenyészetben 25 2,5%, a 6. példa szerint előállított vegyülettel kezelt tenyészetben 1,2%, a 12. példa szerint előállított vegyülettel kezelt tenyészetben pedig 1,9% volt. Ezek az adatok jelentős mitóziscsökkenésre utalnak. 30 B3) Daganatsejt-tenyészeteken végzett vizsgálatok A vizsgálatokat metil-kolantrénnel kiváltott fibroszarkómán [O. Flandre és munkatársai : Reports on the Sittings of the Biology Society, 160 (1), 152 (1966)] vé- 35 gézt ük. A vegyületek hatását in vitro körülmények között tenyésztett daganatsejteken, továbbá helyi vagy intraperitoneális daganatsejt-injekcióval daganatossá tett patkányokon vizsgáltuk. 40 Az in vitro körülmények között végrehajtott előkísérletekben valamennyi vizsgált vegyület késleltette a sejtszaporodást. A 4. és 6. példa szerint előállított vegyület 10-3 mól/liter koncentrációban a kontrolihoz viszonyítva 45 25%-os, illetve 45%-os sejtosztódás-gátlást okozott. 3. Vérlemezkék aggregációját gátló hatás vizsgálata A vérlemezkék aggregációkészségét Born módszerével, Labintec típusú aggregációmérő műszeren határoztuk meg. A műszer kalibrálásához emberi vérből 50 vagy nyúlvérből előállított, vérlemezkékben dús és vérlemezkékben szegény vérplazmát használtunk fel. Ezután meghatároztuk a vérlemezkékben dús plazma aggregációkészségét a vérlemezkékben szegény plazmához viszonyítva. A méréseket guanilhidrazon-vegyület 55 jelenlétében, illetve távollétében végeztük. E mérési eredmények alapján a vérlemezke-aggregáció gátlását a hatóanyagkoncentráció függvényében ábrázoltuk. A kapott görbékből meghatároztuk a pl50-értékeket. Az 1., 4., 5. és 6. példa szerint előállított vegyületek esetén 3 és 4 közötti pl,„-értéket észleltünk ; ezek az értékek azt jelzik, hogy a vegyületek aggregációgátló hatása nagyobb az adenozin azonos koncentrációban fellépő aggregációgátló hatásánál. Az eredményeket az 5. táblázatban közöljük. 5. táblázat Vegyület (példa) PÚ. 4. 2,92+0,03 1. 3,22 ±0,03 5. 3,31 ±0,04 6. 3,25+0,02 2. 2,96+0,03 8. 2,86 ±0,04 9. 3,28 ±0,05 10. 3,16 ±0,03 11. 3,09 ±0,02 13. 3,25 ±0,02 14. 3,01 ±0,02 Lizin-acetilszal icilát 1,29 ±0,04 4. Toxicitás vizsgálata Az LD50-értékek meghatározása során a vegyületeket orális úton, gumiszerű szuszpenzió formájában egereknek adtuk be. Az 1., 4., 5. és 6. példa szerint előállított termékek LDJ0-értéke 100—200 mg/kg nagyságrendű volt. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) általános képletü új guanilhidrazonszármazékok és gyógyászatilag alkalmazható savaddiciós sóik előállítására — ahol R,, R2, R3, R4 és R5 egymástól függetlenül hidrogénatomot, halogénatomot, rövidszénláncú alkil-csoportot vagy alkoxi-csoportot jelent, és R és R' jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metil-csoport —, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű aldehidet — ahol R, R', Rj, R2, R3, R4 és R5 jelentése a fenti— vagy e vegyület diacetálját aminoguanidinnal vagy egy aminoguanidin-sóval reagáltatjuk, és kívánt esetben az (I) általános képletű bázisokat gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóikká alakítjuk, illetve kívánt esetben az (I) általános képletű vegyületek sóiból felszabadítjuk a bázist. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet — ahol R, R', Rj, R2, R3, R4 és R5 jelentése az 1. igénypontban megadott — vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddícíós sóját gyógyszerészeti hígító-, hordozó- és/vagy segédanyagokkal keverjük össze, és gyógyászati készítménnyé alakítjuk. 2 db rajz A kiadásért felei: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója Sl.944.6642 Alföldi Nyomda, Debrecen — FeJeJSs vezető: Benkő István igazgató 5
