176003. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergokrisztint termelő, rozsra-virulens claviceps-purpurea törzs spóratenyészetének előállítására
5 176003 6 b) mannit-citrátos agáron 28 nap után 1,0— -l,5cm-es lapos krémszínű redőzött telepek, 15. naptól kezdve konídiumképzés, a konídiumok átlagos mérete (100 válogatás nélküli szem) 2,5/zm, felülete sima. GYNKI 661/1974 törzs a) a maláta agáron 28 nap után 0,8— -12,0cm-es szürkésfehér színű szétterülő légmicéliumos telepek, 15. naptól kezdve konídiumképzés, a konídiumok átlagos mérete 3,4^tm. b) mannit-citrátos agáron 28 nap után 1,5— -2,0 cm-es fehér, filces szétterülő telepek, a 20. naptól kezdve konídiumképzés, a konídiumok átlagos mérete 4/mi. c) a szlderócium átlagos mérete (100 válogatás nélküli szem) 18 mm, felülete repedezett. Az új törzs fentiek alapján átlag kétszeresére növeli az oltóspórát előállító fermentáció hozamát, mintegy másfélszeres a droghozama és közel kétszeres az alkaloidtartalom. A hatóanyagtartalom emelkedés kedvezően befolyásolja az alkaloidkinyerés hatásfokát, ehhez hozzájárul még az az előny is, hogy az alkaloid növekedést nem kíséri a zsíranyagok fokozott halmozódása, relatív mennyiségük tehát csökken. A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példák szemléltetik: 1. példa Az OKI-nál 00163 szám alatt deponált törzs 24 napos maláta-agár tenyészetével 5 literes üvegfermentorban az alábbi összetételű táptalajt oltjuk be: malátakivonat 2,0% burgonyapor 1,0% glükóz 0,5% A táptalaj pH-értéke 6,0. Az inkubálást 24 °C-on keverés mellett (440 fordulat/perc) 0,5 1/perc levegőztetéssel 3 napig végezzük. A tenyészettel 100 liter alábbi összetételű táptalajt oltunk be: mannit 8,0% citromsav 0,7% kukoricalekvár (szárazanyagra számolva) 0,1% Kálium-dihidrogén-foszfát 0,025% Magnézium-szulfát 0,025% A fermentációt 160/1-es saválló, keverős fermentorban végezzük. Inkubálást 24 °C-on keverés mellett (230 fordulat/perc) és (1,0 1/1 perc levegőztetéssel 4,5-5,0 pH értéken 6 napig végezzük. A pH-értékét ammónium-hidroxid-oldat adagolással tartjuk a megadott tartományon belül. A fermentlé spóraszáma: 4,2 x 10*/ml A biomasszát elválasztjuk, majd 30 liter 10%-os szacharóz-oldattal hígítjuk, palackokba töltjük és mélyhűtve tároljuk. Az oltóspóra készítmény spóráinak csírakészsége 99%. A termékek 30 000 spóra/mm3 koncentrációra hígítva kalászolás előtti stádiumban levő rozsot fertőztünk 5 ha-os kísérleti táblán. A betakarításból ha-onként 250 kg drogot nyerünk. A drog zsírolajtartalma: 20%. Ergokrisztin tartalom: 6,2 mg/g Ergotamin tartalom: 0,1 mg Ergometrin tartalom: 0,2 mg 2. példa Az OKI-nál 00163 szám alatt deponált törzset maláta-agáron 24 °C-on 21 napig tenyésztjük, a kapott spórákat steril fiziológiás só-oldattal mossuk le. A só-oldattal fitotronban nevelt rozsot fertőzünk. A fertőző spórákat kalászonként 5 szúrással injekciós fecskendővel juttatjuk a termőtestbe. Összehasonlításul a 661/1974 számú törzzsel azonos módon járunk el. Törzsenként 100—100 kalászt fertőzünk. A kifejlett szkleróciumokat érett állapotban gyűjtjük. Az új, valamint az összehasonlításul használt törzzsel kapott eredményeket az alábbi táblázatba foglaltuk. Szkle-Szkle-Ergo-Törzs rócium rócium krisztin db ossz. súly g tartalom mg/g OKI 00163 470 79 5,9 661/1974 420 57 3,0 3. példa Az OKI-nál 00163 szám alatt deponált törzs 28 napos maláta-agar tenyészetét steril fiziológiás só-oldattal lemossuk, a fertőző folyadék spóraszámát 30 000 spóra/mm3-re beállítjuk. Azonos előkészített 661/1974 számú törzzsel való összehasonlításra négy ismétlésben 30m2-es parcellákat fertőzünk. A fertőzést kézi fertőzőlapokkal végezzük. A termést kézzel, veszteségmentesen begyűjtjük. Az új, valamint az összehasonlításul használt törzzsel elért eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
