175922. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás gamma-karboxi-glutaminsav és védett származékai előállítására
3 175922 4 és R jelentése a fenti - N-védett amino-malonészter önmagában ismert, Mannich-vegyületen keresztül haladó kondenzációjával, s különösen akkor érhető el jó hozam, ha a Mannich-vegyületet a III általános képletű malonészterből alakítjuk ki, és ezt reagáltatjuk a IV általános képletű vegyülettel. A fentiek alapján a találmány új eljárás 7-karboxi-glutaminsav és la, Ib, Ic általános képletű védett származékai — ahol X jelentése a peptidszintézisekben használatos acil- vagy uretán-típusú amino-védőcsoport, továbbá R és R’ jelentése a peptidszintézisekben használatos, egymástól függetlenül szelektíven eltávolítható karboxil-védó'csoport - előállítására, amely abban áll, hogy valamely III általános képletű malonésztert — ahol R’ jelentése a fenti — és formaldehidet valamely IV általános képletű N-védett amino-malonésztenel — ahol X és R jelentése a fenti - kondenzálunk, majd a kapott II általános képletű l-amino-l,l,3,3-propántetrakarbonsav-származék — ahol X, R és R’ jelentése a fenti - egyik R csoportját lehasítjuk, ezt követően a kapott vegyületet dekarboxilezésnek vetjük alá és a kapott I általános képletű 7-karboxi-glutaminsav-származékról — ahol X, R és R’ jelentése a fenti — a védőcsoportokat teljesen vagy részlegesen eltávolítjuk. A kívánt vegyületet önmagában ismert módon különítjük el a reakcióelegyből, célszerűen kristályosítás útján. A találmány szerinti eljárásban az egymástól szelektíven eltávolítható R és R’ védőcsoportként választhatjuk a tercier-alkil- és primer-alkil- vagy vagy primer-aralkil-csoport párt, valamint a primer-alkil- és primer-aralkil-csoport párt. Előbbi esetben a szelektív eltávolítást biztosítja, hogy a tercier-alkilészterek savval, míg a primér-alkil- vagy primér-aralkilészterek lúggal hasíthatok le. A második esetben az R és R’ csoportok szelektív eltávolítása úgy érhető el, hogy az aralkilészterek hidrogenolízissel hasíthatok az alkilészterek mellől, amelyek azután lúgos hidrolízissel távolíthatók el. Acil-típusú amino-védőcsoportként használhatjuk a formil-csoportot, míg uretán-típusú védőcsoportként előnyösen benziloxikarbonil-védő csoportot használhatunk. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A példádban a hőmérsékleteket °C-ban adjuk meg. Az Rf-értékeket szilikagél vékonyrétegkromatográfiával határoztuk meg (Kieselgel G, Reanal, Budapest) az alábbi oldószerekben: 1. Etilacetát-n-hexán (1 : 2) 2. Etilacetát-n-hexán (1:3) 3. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz (120 :20 : 6 : 11) 4. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz (480 : 20 :6 : 11) 1. példa N-FormiW-karboxi-glutaminsav-7,7-di-terc-butil-észter (la általános képletű vegyület, ahol X formil-csoportot, R’ terc-butil-csoportot jelent) előállítása 1. lépés: l-formamido-l,l,3,3-propántetrakarbonsav- l,l-dietil-3,3-di-terc-butil-észter (II általános képlet, ahol X formil-csoportot, R etil-csoportot, R’ terc-butil-csoportot jelent). 43 g (200 mmól) di-terc-butil-malonát és 21,7 ml (200 mmól) piperidin elegyét 10°-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 25 ml (250 mmól) 35%-os vizes formaldehid-oldatot olyan ütemben, hogy a hőmérséklet 10° alatt maradjon. A keletkezett emulziót tovább kevetjük hűtés nélkül egy órán át, majd háromszor 100 ml éterrel kivonatoljuk. Az éteres oldatokat egyesítés után vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz 33,3 g (164 mmól) formamido-malonsav-dietilésztert és 6,4 g (160 mmól) porított nátrium-hidroxidot adunk, majd 45°-on 3 órán át keverjük. Ezt követően a csapadékos reakcióelegyet háromszor 200 ml éterrel kivonatoljuk, az éteres oldatokat egyesítjük, majd 1 n vizes sósavval, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal és ismét vízzel mossuk. Vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után az éteres oldatot csökkentett nyomáson körülbelül a felére töményítjük, majd hűtjük. A kivált kristályokat kiszűrjük, n-hexánnal mossuk és szárítjuk. 57,4 g (67%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 83-85°, Rj 0,38-0,47. Elemzési eredmény a C2oH3309N (M: 431,5) képletre vonatkoztatva: számított: C =55,67%, H =7,7%, N = 3,25%, talált: C =55,65%, H =7,6%, N = 3,3%. 2. lépés: l-formamido-l,l,3,3-propántetrakarbonsav-l-etil-3,3-di-terc-butil-észter (Ha általános képletű vegyület, ahol X formil-csoportot, R etilcsoportot, R’ terc-butil-csoportot jelent). 14,2 g (33 mmól) formamido-propántetrakarbonsav-tetraésztert (1. példa, 1. lépés) feloldunk 150 ml etanol és 60 ml víz elegy ében, majd hozzáadunk 33 ml 2 n nátrium-hidroxidot. 30 perc keverés után a reakcióelegyet 6 n vizes sósavval (körülbelül 12 ml) 3-as pH értékre savanyítjuk, és az etanolt csökkentett nyomáson kidesztilláljuk. A kivált kristályokat kiszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 13 g (97,6%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: 102-104°, Rf 0,32-0,42. Elemzési eredmény a C18H2909N (M: 403,4) képletre vonatkoztatva: számított: C = 53,59%, H = 7,24%, N = 3,47%, talált: C =53,63%, H =7,18%, N = 3,55%. 3. lépés: N-formil-7-karboxi-glutaminsav-7,7-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
