175659. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 35665 RP jelű antibiotikum előállítására
5 175659 6 hető fejlődést meggátol. A különféle meghatározások eredményeit a II. táblázatban foglaltuk össze; itt a legkisebb gátló koncentrációkat anyag mikrogramm/ml tápközegként fejezzük ki. II. táblázat Mikroorganizmus Legkisebb gátló koncentráció (ng/ml) Staphylococcus aureus — 209 P törzs ATCC 6538 P 0,00051 Staphylococcus aureus — 133 törzs Institut Pasteur 0,0013 Staphylococcus aureus — Smith törzs 0,0010 Micrococcus lysodeikticus — ATCC 4698 0,00027 Sarcina lutea — ATCC 9341 0,00046 Streptococcus faecalis — ATCC 9790 0,0016 Streptococcus faecalis — ATCC 8043 0,00078 Streptococcus pyogenes — Dig 7, törzs Institut Pasteur 0,00014 Diplococcus pneumoniae — Til törzs 0,00017 Neisseria catarrhalis — A 152 törzs Institut Pasteur 0,0072 Bacillus subtilis — ATCC 6633 0,0023 Bacillus cereus — ATCC 6630 0,021 Mycobacterium species — ATCC 607 50 Escherichia coli — ATCC 9637 200 Proteus vulgaris — A 272 törzs Institut Pasteur 200 Klebsiella pneumoniae — ATCC 10 031 200 Pseudomonas aeruginosa — Bass törzs Institut Pasteur 200 A 35 665 RP antibiotikum toxicitását egerekkel végzett állatkísérletekben tanulmányoztuk. Perorálisan beadva, ez az antibiotikum 2,5 g/kg adagban sem toxikus. A 35 665 RP antibiotikumot a noziheptid néven ismert 9671 RP antibiotikum kíméletes hidrolízisével állíthatjuk elő. A noziheptidet és Streptomyces actuosus (NRRL 2954) tenyésztéseivel való előállítását az 1 392 453 számú francia szabadalmi leírás ismerteti. Ennek az antibiotikumnak feltételezett szerkezetét a Tetrahedron Letters, 16, 1395—1406 (1977) közölte, és ez a szerkezet olyan I általános képletű vegyület szerkezetének felel meg, amelynek képletében R —CONH—C—CONH2 képletű csoportot jelent. A találmány szerinti eljárás lényege, hogy a —C—CONH2 képletű csoportot egy hidrogénatommal helyettesítjük anélkül, hogy a molekula többi részét befolyásolnánk, különösen anélkül, hogy a pepton- vagy laktonkötéseket felszakítanánk. A reakciót általában úgy hajtjuk végre, hogy a noziheptidet ásványi sav és iners szerves oldószer elegyében vagy 3-nál kevesebb szénatomot tartalmazó szerves sav vizes oldatában feloldva, 40 és 120 °C közötti hőmérsékleten melegítjük. A reakcióközeg hőmérsékletétől és savasságától függően a reakció időtartama 10 perc és 4 óra között lehet. Alkalmas reakcióközegként például vízmentes hidrogénklorid 1—5 n oldatát metilénklorid és metanol elegyében vagy 95 térfogatszázalékos vizes acetonsav-oldatot használhatunk. A kapott 35 665 RP antibiotikumot a reakcióközegből valamely, a vegyületet nem oldó oldószer hozzáadásával leválasztva kiszűrjük. A 35 665 RP vegyületet fizikai-kémiai módszerekkel, például kromatográfiával tisztíthatjuk. A következő példák a találmány gyakorlati kivitelezését szemléltetik, de hatályát semmiképpen nem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 1. példa 100 g noziheptidet 10 ml, 90: 10 térfogatszázalékos ecetsav—víz-elegyben szuszpendálunk, és a kapott szuszpenziót 1 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk. A kapott oldatot lehűlés után 100 ml dietiléterbe öntjük. A keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, 50 ml dietiléterrel mossuk és 5 Torr nyomáson, 35°-on szárítjuk. Az így kapott 100 g terméket nagy teljesítményű folyadék-kromatografálás (C. L. H. P.) segítségével kétszer tisztítjuk. Rozsdamentes acélból készült, 60 cm hosszú és 0,75 cm átmérőjű oszlopot használunk, és ezt 15 g 10—40 (i.m szemcseméretű, 300 bar (225 000 Torr) nyomással tömörített kovasavgélíel töltjük. Mindegyik művelet során az oszlopba 1 ml, 80: 20: 0,25 térfogatrész kloroform—etanol—víz-keverékben oldott, 50 mg terméket injektálunk. Az eluáló oldószer kloroform—etanol—víz 95 : 5 : 0,25 térfogatarányú elegyéből áll. Az eluálást 50 bar nyomáson (37 500 Torr) végezzük 2,5 ml/perc sebességgel; majd az optikai sűrűséget 360 nm hullámhossznál folyamatosan mérjük. A 35 665 RP antibiotikumot tartalmazó frakciót fénytől védett, csökkentett nyomáson bepárolva, 13 mg tiszta 35 665 RP antibiotikumot kapunk. 2. példa 100 mg noziheptidet 8 n hidrogénkloridot tartalmazó, 10 ml 70: 30 térfogatarányú metilénklorid—metanolelegyben szuszpendálunk, és a kapott szuszpenziót 1 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, majd 20—25°-ra lehűtjük. A kapott oldatot 100 ml dietiléterbe öntjük. A kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, 50 ml dietiléterrel mossuk, és 35 °C-on, 5 Torr nyomáson szárítjuk. Ily módon 100 mg terméket kapunk, és ezt az 1. példában leírt körülmények között tisztítjuk, mire 27 mg 35 665 RP antibiotikumot kapunk. A 35 665 RP antibiotikumot az állatok takarmányába keverve, az állatok sokkal gyorsabb súlynövekedése érhető el, mint az ilyen antibiotikumot nem tartalmazó takarmány etetésével. Másrészt ennek az antibiotikumnak az is előnye, hogy tartósan tárolható és az állatoknak bármely szokásos táplálékához hozzá lehet keverni anélkül, hogy a raktározás alatti megváltozásától tartani kellene. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
