175652. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L-piroglutamil -L-hisztidin -származékok előállítására
5 175652 6 thyl Sepnadex C—25” gyanta (gyártja a Pharmacia AB. svéd cég) olyan oszlopára (az oszlop 2 cm átmérőjű és a gyanta nedves súlyára vonatkoztatva 50 g gyantát tartalmaz), amelyet 1%-os vizes piridin-oldattal egyensúlyba hoztunk. Az oszlopot ezután gradiens-eluálás technikájával eluáljuk 5%-os vizes piridin-oldatot használva egy. 1 literes gömbalakú, 1%-os vizes piridin-oldattal töltött keverőedényen át. A terméket tartalmazó frakciókat, azaz azokat a frakciókat, amelyeknek az Rf (3B; e jel és a további példákban található hasonló jelek magyarázatát a későbbiekben még megadjuk) értéke 0,48, összeöntjük, majd bepároljuk és a maradékot dietiléterrel eldörzsöljük, amikor 0,70 g amorf csapadék formájában monohidrátként a cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 145—148 °C [*]“= = -46,7° (c=l, víz). Elemzési eredmények a képlet alapján: számított: C%#=51,8, H%=6,7, N%=21,3; talált: C%=52,5, H%«7,0, N%=21,3. 2. példa L-Piroglutamil-L-hisztidil-transz-3-etil-DL-prolinamid A) lépés — DL-transz-3-Etil-prolin 50 ml vízmentes etanolban feloldunk 11,5 g (38 millimól) benziloxikarbonilaminomalonsav-dietilésztert, majd az így kapott oldatot hozzáadjuk 150 mg fémnátrium 10 ml vízmentes etanollal készült oldatához. A kapott elegyhez keverés közben cseppenként hozzáadjuk 3,2 g (38 millimól) 2-pentenál 10 ml etanollal készült oldatát, majd a reakcióelegyet 1 órán át keverjük. Ezután beadagoljuk 0,29 ml ecetsav 1 ml etanollal készült oldatát, majd az így kapott oldatot atmoszferikus nyomáson 2 g szénhordozós palládiumkatalizátort (5% fémtartalommal) használva 2 órán át hidrogénezzük. A katalizátort ezután kiszűrjük, a szűrletet pedig bepároljuk. A maradékot kloroformban feloldjuk, a kapott oldatot kis mennyiségű nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmazó vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, A maradék 15 torr nyomáson végzett desztillálása útján 5,65 g mennyiségben 4-etil-5,5-dietoxikarbonil-2-pirrolint kapunk 115—120 °C forráspontú (15 torr nyomáson) színtelen olajként, amelynek infravörös spektrumában 1610 cm-,-nél és 1715 cm"'-nél észlelhető jellegzetes abszorpciós csúcs. A kapott pirrolin-származékból ezután 4,68 g-ot (19,5 millimól) feloldunk 80 mi i mólos vizes nátrium-hidroxid-oldat és 80 mletanol «legyében, majd a kapott oldatot 50 °C-on'4 órámét keverjük. Az oldatot ezután lehűtjük, 1,0 g nátrium-bór-hidridet adunk hozzá és 25 °C-on-további 10 órán át keveijük. Az oldatot ezután híg sósavoldattal óvatosan megsavanyitjuk, így pH-ját 4-re beállítjuk, majd bétöményítjtik és felvisszük 100 ml H+-formájú „Dowex 50WX8” gyantával töltött oszlopra. 2 mólos vizes ammónium-hidroxid-oldattal végzett eluálás útján olyan oldatot kapunk, amely bepárolva 2,1 g 208—209 °C olvadáspontú DL-transz-3-«til-prolint ad. A vegyfi)et:«f éríéfce(3»J 0,43. Jeol 6AH tÉpusú sninonsdiiizévti (50 cm-es+osaSop, n nátriaro-nitrát puffer, 3,25 pH, 57 °C hőmérséklet) végzett elemzés során egyetlen csúcs (117 perces eluálási idővel) észlelhető. B) lépés — DL-terc-Butoxikarbonil-transz-3-etil-prolin A cím szerinti vegyületet az 1. példa A) lépésében ismertetett módon 1,72 g DL-transz-3-etiI-prolinból állítjuk elő, amikoris olaj formájában 2,82 g mennyiségben képződik. Rf (3 A) 0,92. C) lépés — DL-terc-Butoxikarbonil-transz-3-etil-prol inamid A cím szerinti vegyületet az előző lépésben kapott vegyület 3,5 g-jából az 1. példa Belépésében ismertetett módon állítjuk elő, amikoris szilikagéllel töltött oszlopon végzett kromatografálás után 3,1 g terméket kapunk 78—80 °C olvadáspontú fehér kristályok alakjában. D) lépés — DL-transz-3-Etil-prolinamid-hidroklorid A cím szerinti vegyületet az előző lépésben kapott vegyület 3,0 g-jából az 1. példa C) lépésében ismertetett módon állítjuk elő, amikoris 1,5 g terméket kapunk 206—207 °C olvadáspontú fehér kristályok alakjában. Rf (3 A) 0,22 és R f (3B) 0,72. E) lépés — DL-transz-3-Etil-prolinamid 0,5 g DL-transz-3-etil-prolinamid-hidrokloridot feloldunk vízben, majd a kapott vizes oldatot átbocsátjuk OH "-formájú DEAE-Sephadex gyantával töltött oszlopon. A terméket tartalmazó frakciókat (az erre vonatkozó vizsgálatokat vékonyrétegkromatográfiásan végezzük) összeöntjük, majd szárazra pároljuk, amikoris 0,45 g mennyiségben a cím szerinti vegyület hidrátját kapjuk 89,5—91 °C olvadáspontú fehér csapadék formájában. R,(3A)0,22és Rf(3B)0,72. F) lépés — L-Piroglutamil-L-hisztidil-transz-3-etil-DL-prol inamid 6 ml dimetil-formamidban feloldunk az előző lépésben kapott vegyületből 288 mg-ot (2 millimól), továbbá 822 mg benziloxikarbonil-L-piroglutamü-L-hisztidmt és 550 mg (4 millimól) hidroxi-benzotriazolt, majd a kapott oldatot 0 °C-ra lehűtjük, ezután 480 mg (2,2 millimól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá és 18 órán át keverjük az így kapott reakcióelegyet. Ezt követően a reakcióelegyet szűrjük, majd a szűiíetet bepároljuk. A kapott olajat feloldjuk tetrahidrofurán és víz 1:1 arányú elegyéből 80 ml-ben, majd a kapott oldathoz 60 mg szénhordozós palládiumkatalizátort (1% fémtartalommal) adunk és az oldatot atmoszferikus nyomáson 4 órán át hidrogénezzük. A katalizátort ezután kiszűrjük, a szűrletet pedig szárazra pártájuk. A kapott nyúlós gyantát 50 ml etil-acetát és 80 ml víz között megosztjuk. A vizes fázist elkülönítjük, szárazra pároljuk és a maradékot feloldjuk 1% ecetsavat és 0,05% piridint tartalmazó vizes oldatban. Ezt az oldatot azután felvisszük piridiniumformájú „S. P. — Sephadex C—-25” gyantával töltött oszlopra, amelyet előzetesen 1% ecetsavat és 0,05% piridint tartalmazó vizes oldattal 5 •* 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 61 3
