175601. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás szekunder glikozidok előállítására primer digitálisz glikozodokból
7 175601 Az I. nyersterméket és a II—III. félkészterméket együttesen elporítjuk, 5 liter metanol-benzol 1:1 arányú keverékében felvesszük, aktív szénnel kevertetjük, majd alumíniumoxid-rétegen szűrjük. A szűrlethez keverés közben 2,5 liter csapvizet folyatunk. 0 °C-on 48 órán át kristályosítjuk. A benzolos fázist elöntjük, a kristályokat szűrjük, benzollal, illetve metanol-víz 1:1 arányú keverékével mossuk, és 50 °C-on súlyállandóságig szárítjuk. Kitermelés: 310 g digitoxin (legalább 97%-os tisztaságú). Az anyalúgot és a mosófolyadékot egyesítve és feldolgozva további 25 g digitoxin nyerhető ki. Hozam: 85%. 2. példa Az 1. példában leírt módon előállított — átalakításra alkalmas — mikroorganizmus tenyészetét szűrjük, a micéliumot vízzel mossuk, majd olyan mennyiségű —20 °C-os acetonba helyezzük, hogy a micéliumot ellepje. 1 órás —20 °C-os kevertetés után az acetonos keveréket hidegen leszűrjük, és a micéliumot szobahőmérsékleten súlyállandóságig szárítjuk. így eljárva 70 g enzimpreparátumot nyerünk. 70 g — egy hónapnál nem régebbi — enzimpreparátumot keverés közben 80 liter 0,01 M pH—7-es foszfátpufferben felszuszpendálunk, majd keverés közben 350 g lanatozid A forró tömény metanolos oldatát adjuk hozzá. Az enzimpreparátum és a szubsztrátum keveréket 28 °C-on kevertetjük, és az átalakítás menetét vékonyrétegkromatográfiával követjük. 48—60 óra eltelte után a szubsztrátum elfogy, és a kromatogrammon kizárólag a digitoxin foltja látható. Az elegy feldolgozását az 1. példában leírtak szerint végezzük. Hozam: 236 g digitoxin (85%). 8. példa Az 1. példa szerint előállított fermentlé vagy a 2. példa szerint előállított, foszfátpufferban szuszpendált enzimkészítmény 1 literében 5 g lanatozid B átalakítását végezzük el, és a keletkezett gitoxint a fermentléből ismert módon elkülönítjük. Hozam: 3,37 g (85%). 4. példa 5 g lanatozid C-ből kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,34 g (84%) digoxint nyerünk. 5. példa 5 g acetildigitoxinből kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,95 g (85%) digitoxint nyerünk. 6. példa 5 g acetildigitoxinből kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,92 g (84%) gitoxint nyerünk. 7. példa 5 g acetildigoxinból kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,90 g (84%) digoxint nyerünk. 8. példa 5 g deacetil-lanatozid A-ból kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,54 g (84%) digitoxint nyerünk. 9. példa 5 g dezacetil-lanatozid B-ből kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,55 g (84%) gitoxint nyerünk. 10. példa 5 g dezacetil-lanatozid C-ből kiindulva és mindenben a 3. példa szerint eljárva 3,51 g (83%) digoxint nyerünk. 11. példa Mindenben az 1. vagy 2. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a szubsztrátum lanatozid A helyett lanatozid A, lanatozid B, lanatozid C, dezacetil-lanatozid A, dezacetil-lanatozid B, dezacetil-lanatozid C, acetildigitoxin, acetilgitoxin és acetildigoxin bármilyen arányú keveréke. A végtermék az „A” sorbeli digitoxin, a „B” sorbeli gitoxin és a „C” sorbeli digoxin keveréke lesz annak az aránynak megfelelően, ahogyan a keverék-szubsztrátumban az „A” sorbeli (lanatozid A, dezacetil-lanatozid A, acetildigitoxin), „B” sorbeli (lanatozid B, dezacetillanatozid B, acetilgitoxin) és „C” sorbeli (lanatozid C, dezacetil-lanatozid C, acetildigoxin) vegyületek szerepeltek. Hozam: 84%. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás I általános képletű — ahol Rí és R2 jelentése hidrogénatom vagy hidroxil-csoport — digitálisz szekunder glükozidok mikrobiológiai dWHrtiw, azzal jellemezve, hogy valamely II 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
