175584. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amiláz mentes ciklodextrin-glükozil-transzferáz enzim tisztítására
7 175584 8 sterilizáljuk. A fermentálást 28 °C-on 13 napon át folytatjuk rázóasztalon. A fermentáció befejezésekor a fermentlé ciklodextrin-glükoziltranszferáz tartalma 200 THE/ml, illetve 220 Fuwa-egység/ml. 5. példa 500 ml-es Erlenmeyer lombikba 100 ml „C inokulum” jelű táptalajt mérünk be. A táptalaj összetétele: 30 g kukoricaliszt, 3 g diammónium-hidrogén-foszfát, 15 g 10 kalcium-karbonát, 4 g A3-Antihabzin jelű készítmény és 1000 ml csapvíz; pH-ja 6,9—7,0 közötti. A táptalajt 0,5 ml lO^ml csíraszámú spóraszuszpenzióval oltjuk be, amely spóraszuszpenziót a Bacillus species BM— 10—68 (OKI 00154.) törzs 1. példában megadott „Aj” 15 spóráztató táptalajon előállított tenyészetéből készítettünk. Az Erlenmeyer lombikon 28 °C-on 48 órán át rázóasztalon rázatjuk. A kapott tenyészetet oltóanyagnak használjuk. 500 ml-es Erlenmeyer lombikba 100 ml „Cj” jelű 20 fermentációs táptalajt mérünk be és beoltjuk a fenti tenyészet 5 ml-ével. A ,,C]” jelű fermentációs táptalaj öszszetétele : 50 g kukoricaliszt, 4 g diammónium-hidrogénfoszfát, 20 g kalcium-karbonát, 3 g A3-antihabzin készítmény és 1000 ml csapvíz; pH-ja 6,8—7,0 közötti. 25 A fermentálást 28 °C-on 13 napig folytatjuk rázóasztalon. A fermentáció befejezésekor a fermentlé ciklodextrin-glükoziltranszferáz enzimtartalma 160 THE/ml, illetve 250 Fuwa-egység/ml. 6. példa A Bacillus species BM—10—68 (OKI 00154.) törzs 5. példa szerint előállított oltóanyagának 5 ml-ével a következő összetételű, „C2” jelű fermentációs táptalajt 35 oltjuk be: 50 g kukoricaliszt, 4 g diammónium-hidrogén-foszfát, 20 g kalcium-karbonát, 4 g diammónium-hidrogén-foszfát, 20 g kalcium-karbonát, 4 g A3-Antihabzin készítmény, 0,02 g 5000 SKBE/g aktivitású a-amiláz és 1000 ml csapvíz; pH-ja 6,8—7,0 közötti. A hidrolízist 40 a 4. példában megadott körülmények között végezzük el. A fermentálást 28 °C-on 13 napon át folytatjuk rázóasztalon. A fermentáció befejezésekor a fermentléciklodextrin-glükoziltranszferáz enzim-tartalma 210 THE/ml, illetve 210 Fuwa-egység/ml. 7. példa A Bacillus species BM—10—68 (OKI 00154.) törzsnek az 1. példában megadott „A,” spóráztató táptalajról nyert spóraszuszpenziója [élő csíraszám 106/ml] 150 ml-ével beoltunk 1 m3 hasznos térfogatú inokulum készüléket, amely a következő összetételű steril táptalajt tartalmazza : 30 kg zabliszt, 3 kg diammónium-hidrogén- 55 -foszfát, 15 kg kalcium-karbonát, 4 kg A3-Antihabzin, 1000 liter csapvíz; pH=6,9. Az oltóanyag előállításához 60 m3/óra levegőztetést alkalmazunk, a keverő fordulatszáma 180 fordulat/perc. A hőmérsékletet 37 °C-on tartjuk 24 óráig. 50 liternyi kifejlődött oltóanyagot át- 60 oltunk az 1 m3 hasznos térfogatú fermentorba, amely a következő összetételű steril táptalajt tartalmazza: 50 kg zabliszt, 4 kg diammónium-hidrogén-foszfát, 20 kg kalcium-karbonát, 4 kg A3-Antihabzin jelű készítmény, 20 g a-amiláz [5000 SKBE/g], 1000 liter csapvíz; pH= =7,0. A táptalaj szénhidrát-tartalmának eifolyósítása 5 még a sterilizálás előtt a 4. példában megadott módon történik. A fermentációt 37 °C-on 60 m3/óra levegőztetéssel, 180 fordulat/perc kevertetéssel folytatjuk 112 óráig. A fermentáció befejezésekor a fermentlé ciklodextrin-glükoziltranszferáz enzim-tartalma 190 THE/ml, illetve 210 Fuwa-egység/ml. 8. példa A 7. példa szerint előállított 900 liter fermentlevet perlitet (KÖSZIG, Tapolca) használva szűrési segédanyagként, vákuumdobszűrőn megszűrjük. A kapott 75 liter szűrlet ciklodextrin-glükoziltraszferáz enzim-tartalma 190 TH egység/ml, pH-ja 7,2. A szűrletet ezután bepárlón 80 literre bepároljuk, majd 25 °C-ra visszahűtjük. A koncentrátum ciklodextrin-glükoziltranszferáz tartalma 175,0 THE/ml (kitermelés: 98,2%). Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás ciklodextrin-glükozil-transzferáz enzim elő- 30 állítására Bacillus törzsek fermentációjával, azzal jellemezve, hogy az enzimet termelő valamely Bacillus törzset ß-ciklodextrint tartalmazó szelektív táptalajon tenyésztjük, majd ismert módon, célszerűen ultraibolya vagy röntgen besugárzással mutáljuk és a mutánsokat ismét ß-ciklodextrint tartalmazó táptalajon fermentáljuk, az ilyen módon kapott 150—250 THE/ml aktivitású törzseket, előnyösen az MNG 00154 jelű Bacillus macerans törzset a-amilázzal elfolyósított keményítőt tartalmazó táptalajon tenyésztjük és a fermentáció befejezése után a ciklodextrin-glükoziltranszferáz enzimet ismert módon izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy kiindulási törzsként rothadt burgonyáról izolált Bacillus törzset alkalmazunk. 45 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,1—0,5%, előnyösen 0,4% ß-ciklodextrint tartalmazó szelektív táptalajokat alkalmazunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási mód- 50 ja, azzal jellemezve, hogy a ciklodextrin-glükoziltranszferáz enzim termelésére szelektív táptalajként 1—7%, előnyösen 5% zablisztet és/vagy kukoricalisztet, burgonyalisztet, burgonyakeményítőt, illetve maltózt és 0,5— 4% élesztőkivonatot, kukoricalekvárt, kazeinhidrolizátumot vagy peptont 0,1—0,8%, előnyösen 0,4% diammónium-hidrogén-foszfátot, 0,5—3,0%, előnyösen 2,0% kalcium-karbonátot, 0,1—0,6%, előnyösen 0,4% habzásgátlót tartalmazó táptalajt alkalmazunk. 5. Az 1. és 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációs táptalaj keményítő tartalmát 0,001—0,003%, előnyösen 0,002% 5000 SKB E/g aktivitású a-amilázzal hidrolizáljuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 81.615.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 4
