175520. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-dezoxi-streptamin-amino-glükozid-származékok előállítására
3 175520 4 keket. E vizsgálatokhoz mikroorganizmusként Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus és Streptococcus faecalis törzseket használunk. In vivo értékelés céljából a vegyületeket Escherichia coli törzzsel megfertőzött egereknek adjuk be szubkután úton. Minden vegyületet dózísszint-sorozat formájában adagoljuk az egércsoportoknak és aktivitásukat azzal a dózisszinttel jellemezzük, amely 50%-os védelmet nyújt az Escherichia coli pusztító hatásával szemben 72 órás időtartamot figyelembe véve. Emberi alkalmazás céljából a találmány szerinti vegyületek egyedül, vagy általában a tervezett alkalmazási módnak és a szokásos gyógyszerészeti gyakorlatnak megfelelő gyógyszerészeti hordozókkal elkeverve adagoljuk. Például orálisan alkalmazhatók kötőanyagokat, mint keményítőt vagy laktózt tartalmazó tabletták formájában, vagy kapszulákban egyedül vagy kötőanyagokkal együtt, vagy ízesítő vagy színező anyagokat tartalmazó elixírek vagy szuszpenziók alakjában. Parenterálisan is injiciálhatók, például intravénásán, intramuszkulárisan vagy szubkután. Párénterális adagoláshoz leginkább steril vizes oldatok formájában használhatók, melyek más oldott anyagokat, például megfelelő mennyiségű sókat vagy glükózt tartalmaznak az oldat izotóniássá tétele céljából. Embergyógyászati alkalmazás esetében várható, hogy a találmány szerinti baktériumellenes vegyületek napi dózisszintje összehasonlítható a szokásosan használt amino-glükozid baktériumellenes hatóanyagokéval, például 0,1—50 mg/kg (osztott dózisokban) parenterálisan adva, vagy 10—100 mg/kg (osztott dózisokban) orálisan alkalmazva. így a vegyületekből előállított tabletták vagy kapszulák 0,1 — 1 g hatóanyagot tartalmazhatnak napi 1—4 alkalommal történő orális alkalmazáshoz, míg a parenterális adagolás dózisegységei 10-500 mg hatóanyagot tartalmaznak. Minden esetben a kezelőorvos határozza meg a beteg számára legalkalmasabb dózist, amely függ a beteg korától, súlyától és egyéni reagálásától. A fenti dózisok átlagértékek és természetesen egyes esetekben magasabb vagy alacsonyabb dózistartományok kívánatosak. A következő példában leírjuk egy találmány szerinti vegyület előállítását. A hőmérsékletet Celsius-fokokban adjuk meg, a „Sephadex" bejegyzett márkanév. Példa l-N-[(S)-2-hidroxi -6-amino-hexanoil ]-kan ami cin A-dikarbonátot (1,0 g, 1,36 mM) vízszintes trifluor-ecetsavban (10 ml) oldunk és az oldatot szárazra párolva viszkózus gumit kapunk. A maradékot 1 mólos, tetrahidrofuránnal készült diboránoldattal (75 ml) kezeljük száraz nitrogéngáz-atmoszférában és a kapott oldatot 50—55°-on 5 óráig melegítjük. A szerves oldószert csökkentett nyomáson lepárolva gumiszerű anyagot kapunk, melyet 2 n sósavoldatban (10 ml) felveszünk. 10 perc múlva az oldatot pH 10-ig 5 n nátrium-hidroxid-oldattal meglúgosítjuk, majd pH-ját 2 n sósavoldattal 6-ra állítjuk be.* Az oldatot ammóniumion-forjámú Sephadex CM-25 oszlopon (3,5 x 90 cm) kromatografáljuk, eluensként vizet és növekvő koncentrációjú (0-0,6 n) ammónium-hidroxid-gradienst alkalmazunk. A terméket tartalmazó frakciókat - rétegkromatográfiás elemzés alapján - egyesítjük és vákuumban bepárolva l-N-[(S)-2-hidroxi-6-amino-hexil]-kanamicin A-t kapunk (0,64 g, 63%). Vékonyréteg-elektroforézis. Rf = 0,85 (Az elektrolit ecetsav/hangyasav 1 : 1 arányú, pH 2 értéket mutató elegyéből áll és 900 volt feszültségkülönbséget alkalmazunk a 20 cm-es, szilikagéllel fedett lemezek végei között 45 percig. Az anyag láthatóvá tétele céljából a lapokat megszárítjuk, ciklohexánban oldott terc-butil-hipoklorittal bepermetezzük, szárítjuk, hűtjük és keményítő-KJ oldattal kifejlesztjük. Ilyen körülmények között a kiindulóanyag Rf-értéke 1,0.) Tömegspektrometria Egy mintát illékony penta-N-acetil-okta-O-trimetil-szilil-származékká alakítunk át 24 óráig szobahőmérsékleten metanolos ecetsavanhidriddel kezelve és hexametil-diszilazán és trimetil-klór-szilán elegyével szobahőmérsékleten 24 óráig reagáltatva. CssHj 23N5O17SiOg-képletre m/e talált: 1385, m/e számított: 1385. A példa szerint előállított vegyület in vitro mikrobaellenes hatását a fentebb leírt módon vizsgáltuk. Az eredményeket a következő táblázat mutatja: Táblázat: in vitro aktivitás M. I. C. (/ig/ml) Escherichia coli 6,2 Klebsiella penumoniae 6,2 Proteus mirabilis 3,1 Pseudomonas aeruginosa 3,1 Staphylococcus aureus 1,6 A fentiek alapján megállapítható, hogy olyan új I általános képletű 2-dezoxi-sztreptamin-amino-glükozidokat és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerészetileg elfogadható savaddíciós sókat állítunk elő, amelyek Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok okozta fertőzések leküzdésére használhatók embernél és állatnál, terápiás dózisok alkalmazása útján. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás I általános képletű 2-dezoxi-sztreptamin-amino-glükozidok - ahol 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
