175339. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az MM 17880 jelű ß-laktám-antibiotikum gyógyászatilag elfogadható dibázisos sóinak előállítására
9 175339 tünk. Az oszlopot 4:1 arányú n-propanol-víz eleggyel eluáljuk, 1 ml/perc áramlási sebesség mellett, és a frakciókat 6 ml-enként összegyűjtjük. A frakciók ultraibolya spektrumának felvétele után, azokat, melyek az MM 17880-ra jellemző sepktrumot adják (13-16 frakciók) összegyűjtjük, és az így kapott 24 ml térfogatú elegyből a propanolt csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A maradékot liofilizáljuk és így 17 mg világosbarna amorf anyagot kapunk. A fenti eljárással előállított MM 17880 dinátriumsó tulajdonságai: A fenti eljárással előállított anyag IR-, NMR- és ultraibolya-spektrumai az 1., 2. és 3. ábrákon láthatók. Az antibakteriális aktivitást a mikrotitrálási módszerrel határoztuk meg, a vizsgált organizmus egy éjszakán át állni hagyott inokulumát használva 0,2% koncentrációban. A meghatározott minimális gátló koncentráció értékeket a 3. táblázat tartalmazza. A táblázatból látható, hogy a minimális gátló koncentrációkat két mikroorganizmussal, Klebsiella aerogenesel és Staphylicoccus aureus Russell-lel szemben határoztuk meg. Amint a táblázatból kitűnik, a kapott eredményeket hármas csoportosításban adjuk meg. Megadjuk az MM 17880 hatását önmagában; az ampicillin önmagában és az MM 17880-al kombinálva kifejtett, valamint a cefaloridin önmagában és az MM 17880-al kombinálva kifejtett hatását. A kombinációk után megadott számok az MM 17880 Mg/mi mértékegységben kifejezett koncentrációját mutatják a vizsgált kompozícióban. így például a táblázat harmadik sorában feltüntetett készítményben az MM 17880 koncentrációja 0,02 Mg/ml, a következő sorban 0,1 Mg/ml volt. Az MM 17880 dinátriumsójának I50-értéke az E. coli JT4-ből származó (3-laktamázzal szemben 250x 10"'2 g/ml-nek adódott a 827 331 számú belga szabadalmi leírásban ismertetett módon meghatározva. Az elektroforézises vizsgálat eredményei arra utalnak, hogy a vegyidet dinátriumsó, azaz az MM 17880 egy difunkciós sav. A fenti eljárással előállított MM 17880-dinátriumsó analíziseredményei: 5 C = 31,9%; H = 4,2%; N = 5,4%; S = 13,2%; Na = 11,6%. Megjegyezzük, hogy az analizált anyag liofilizált termék volt, tehát tartalmazhatott vizet vagy más szennyezéseket. Az MM 17880 dinátriumsója a szén, 10 hidrogén és oxigén mellett még ként, nitrogént és nátriumot is tartalmaz 2:2:2 arányban. Az MM 17880 dinátriumsójának spektrális tulajdonságai arra a feltevésre vezetnek, hogy a vegyület egy kondenzált (3-laktám gyűrűt tartalmaz. 15 10 2. táblázat 20 Az MM 17880 antibakteriális hatása különböző mikroorganizmusokkal szemben (Mg/ml) Mikroorganizmus MM 17880 25 '---------------------------------------------------------------------Bacillus subtilis 0,2 Citrobacter freundii Mantio 3,1 Enterobacter cloaceae P99 12,5 E. coli 10418 0,1 30 E. coli JT4 3,1 Klebsiella aerogenes A 0,8 Klebsiella aerogenes Ba95 12,5 Proteus mirabilis 13 1,6 Proteus morganii 1580 1,6 35 Proteus rettgeri WM 16 0,2 Proteus vulgaris WO90 0,2 Pseudomonas aeruginosa A >50 Salmonella typhimurium CT10 0,2 Serratia marcescens US1 0,4 40 Staphylococcus aureus Oxford 0,4 Staphylococcus aureus Russell 0,4 Streptococcus faecalis I 6,2 Streptococcus pyogenes CN10 < 0,04 3. táblázat Az MM 17880 egyedül és ampicillinnel és cefaloridinnal kifejtett aktivitása Minimális gátló koncentráció (Mg/ml) Vegyület vagy kombináció Klebsiella Staphylococcus aerogenes A aureus Russel MM 17880 Ampicillin Ampicillin + 17880 (0,02 Mg/nü) Ampicillin + 17880 (0,1 Mg/ml) Ampicillin + 17880 (0,5 Mg/ml) Cefaloridin Cefaloridin + 17880 (0,02 Mg/ml) Cefaloridin + 17880 (0,1 Mg/ml) Cefaloridin + 17880 (0,5 Mg/ml) 0,2 3,1 250 500 50 6,2 1,25 0,6-0,07 5,0 1,25 1,25 02 1,0 0,06-0,015 5
