175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
19 175306 20 5. példa H-oi.T-Dab-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NHj előállítása. Pontosan a 3. és 4. példában ismertetett módon 535 mg di—Z—<*,7—Dab-diciklohexilaminsóból kiindulva a cím szerinti vegyületet állítjuk elő. Hozama 325 mg. Fajlagos forgatóképessége [a]” = -58,2° (c = 0,50, vízben). Aminosav-elemzés : a,7-Dab : 1,00, Arg: 0,98, Pro: 1,00, Tyr: 0,87, Phe: 1,96 (peptidtartalom 84,2%). 6. példa H-0-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása a) Z—ß—Ala—Arg(N02 )—Pro—OMe előállítása 3,50 g Z-Arg(N02)-Pro-OMe-hez 35 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 35 percen át rázzuk. A keverékhez ezután 300 ml dietilétert adunk, majd a kivált csapadékot kiszűrjük, dietiléterrel mossuk és szárítjuk. Az így kapott port 20 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot jeges hűtés közben trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 2,9 g Z-/3-Ala-ONB-t adunk, majd a keveréket 16 órán át keverjük. Ezután a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékot 300 ml etil-acetátban feloldjuk. Az oldatot ezután háromszor 100 ml 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk, ezt követően pedig vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Ezt követően az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz dietilétert adunk. A kapott port ezután szűréssel elkülönítjük. így 3,05 g (74,3%) mennyiségben a 62-65 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége |a]p2 = - 34.1°(c = 1,04, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C23H3 3OsN7,0,5H2O képlet alapján: számított: C = 50,73%, H =6,29%, N = 18,01%, talált: C =50,98%, H =6,36%, N = 17,72%. b) Z-/3— Alá-Arg(N02 )—Pro—OH előállítása 30 30 ml acetonban feloldunk 2,82 g Z—0—Ala—Arg(N02 )—Pro-OMe-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 10,7 ml 1 normál vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, majd 11 ml 1 normál sósavoldattal semlegesítjük. Ezt követően az acetont csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz (amely olajos konzisztenciájú) 30 ml hideg vizet adunk, ezt követően pedig a vizet dekantáljuk. A maradékhoz ezután mégegyszer hideg vizet adunk, majd a vizet dekantáljuk és a maradékot szárítjuk. Ezt követően a maradékot 90 g szilikagéllel töltött oszlopon eluálószerként etil-acetát, piridin, ecetsav és víz 60 : 20 : 6 :11 arányú elegyét használva kromatografáljuk. Ezután a kívánt termékben dús frakciókat összeöntjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot dietiléterrel mossuk, majd szűréssel elkülönítjük. így 2,62 g mennyiségben a 65—67 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]^2 = —27,5° (c=l,07 dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C22H3i08N7 képlet alapján: számított: C =50,66%, H =5,99%, N = 18,80%, talált: C =50,41%, H =6,19%, N = 18,58%. c) Z—(3—Alá—Arg(N02 )—Pro—Phe-Phe—Tyr—NH2 előállítása 15 ml dimetil-formamidban feloldunk 1,50 g Z-Phe-Phe-Tyr-NH2-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 4 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrlethez jéggel végzett lelehűtése után 1,21 g Z-0-Ala-Arg(NO2)-Pro-OH-t, 0,53 g HONB-t és 0,61 g DCC-t adunk. A reakcióelegyet ezután 18 órán át keverjük, majd a kicsapódott diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk, majd a kivált port kiszűrjük és szárítjuk. A port ezután dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk, így 1,99 g (80,991) mennyiségben a 135-138 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]p2 = -33.1°, (c = 0,9, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C49H590i, N, i *H20 képlet alapján: számított: C =59,08%, H =6,17%, N = 15,47%, talált: C = 58,93%, H = 6.18%. N = 15,02%. d) H-0~Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 40 ml jégecetben feloldunk 1,50 g Z—0—Ala—Arg(N02)—Pro—Phe—Phe—Tyr—NH2-t majd a kapott oldaton palládiumkormot használva 8 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 50 ml vízben feloldjuk, majd a kis mennyiségű oldhatatlan részt kiszűrjük. A szűrletet 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
