175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
43 175306 44 zátumot feloldjuk 10 ml vízben, majd a kapott oldatot 2,3 cm-szer 17 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot 400 ml 0,005 mólos és 400 ml 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 495 ml és 540 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 134 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [ajp3 =-19,62° (c = 0,53, vízben). Aminosav-elemzés : Arg: 1,05, Gly: 1,95, Alá: 1,00, Tyr: 0,86, Phe: 1,98, 0-Ala: 1,02, (peptidtartalom 84%). Elemzési eredmények a C43Hsg09N12 * ;2C2H4 02*4H20 képlet alapján: számított: C =52,31%, H =6,91%, N = 15,57%, talált: C =52,40%, H =6,55%, N = 15,65%, 24. példa H—a.y—Abu—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—Alá— —Gly—NH2 előállítása A 23. példában ismertetett módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy utolsó aminosavként Z-0-Ala-OH helyett di-Z-a.y-Abu-OH-t adagolunk. így a cím szerinti vegyületet kapjuk fehér pelyhes csapadék formájában, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^1 = -20,3° (koncentráció 0,2% vízben). Aminosav-elemzés : Arg: 1,00, Gly: 1,89, Alá: 1,02, Tyr: 0,88, Phe: 2,00, 0,7-Abu: 1,04 (peptidtartalom 81,5%). 25. példa H—Gly—Arg—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása a) Z-Gly-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2 előállítása 0,80 g Z-Arg(N02)—Gly-Phe-Phe-NH2-hoz 8 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk, majd a kapott keveréket szobahőmérsékleten 45 percen át alaposan rázzuk. A reakcióelegyhez ezután 100 ml dietilétert adunk, majd a képződött port kiszűrjük, és nátrium-hidroxid szemcsék felett exszikkátorban csökkentett nyomáson két napon át szárítjuk. A megszárított port feloldjuk 10 ml dimetil-formamidban, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 0,43 g Z-Gly-ONB-t adunk, majd 10 órán át keverjük. Az oldathoz ezután 7 ml vizet adunk, amikor is olaj különül el. Miután az olaj feletti folyadékréteget dekantáltuk, az olajhoz 50 ml vizet adunk. A képződött port kiszűrjük, majd szárítjuk. A terméket ezután még dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből végzett átcsapással tisztítjuk. így 0,66 g (77%) mennyiségben a 119—122 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]o‘ =-24,6° (c=l,01, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C^l^C^N! 0-H20 képlet alapján: számított: C =55,51%, H =5,95%, N = 17,99%, talált: C =55,95%, H=5,90%, N = 17,73%. b) H—Gly—Arg—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 500 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 7 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletből az ecetsavat csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 10 ml vízben feloldjuk, majd a vizes oldatot 1,8 cm-szer 10 cm méretű, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az eluálást a lineáris gradiens módszert alkalmazva 700 ml 0,1 mólos és 700 ml 1 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal végezzük. A 710ml és 515ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 307 mg (65%) mennyiségben fehér pelyhes csapadék formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^2 = -17,7° (c = 0,48, vízben). Aminosa /-elemzés: (hidrolízis sósavval): Arg: 1,15, Gly: 2,00, Phe: 2,00 (peptidtartalom 84,6%). Elemzési eredmények a C28H390SN9* •2C2H402'2H20 képlet alapján: számított: C = 52,09%, H = 6,97%, N = 17,09%, talált: C =52,05%, H =6,85%, N =17,22%. 26. példa H-Leu- Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása a) Z-Arg(N02 )-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 100 ml dimetil-formamidban feloldunk 12,2 g Z—Wie—Phe—Tyr—NH2-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 5 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrlethez 8,6 g Z—Arg(N02 )—Gly—OH-t és 4,3 g HONB-t adunk. Ezt követően jeges hűtés közben az oldathoz még 4,95 g DCC-t adunk, majd a reakcióelegyet 12 órán át keveijük. Ezután a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, majd a szűrlethez 1 liter vizet adunk. A képződött gélt kiszűrjük, majd metanol és víz elegyéből átcsapjuk. így 16,25 g (91,8%) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 22
