175266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dezacetil 890 A1 és dezacetil 890 A3 előállítására
3 175266 4 Morfológia: A sejtek kerekített végű pálca alakúak, méretük 0,9-1,2 x 2,3—4,6 mikron és önállóan vagy párokban fordulnak elő. A 24 órás és 48 órás sejtek a szemcsés megjelenésű Gram-negatív baktériumokat megfestik. A granulák, különösen a poláris granulák Sudan Fekete B-vel feketére színeződnek. A . sejtek 28 °C-on mozgóképesek, azonban 37 °C-on mozgóképességük kérdésessé válik. Tenyésztési jellegzetességek: A tápagar kolóniák először vékonyak, pontformájúak, félig átlátszók és színtelenek/ majd lassan konvex-szé, homályossá, simává, teljes szélűvé és valamivel szárazabb konzisztenciájúvá válnak és színük rózsaszínűvé majd rózsaszínes-pirossá válik. A fermentlé tenyészetek egyformán zavarosak hártyák nélkül. A pigmenttermelés nem függ a fénytől vagy a teszt-hőmérséklettől (28 °C és 37 °C). A pigment acetonban oldódik, azonban vízben és kloroformban oldhatatlan. Tápagaron és agy-szív infúziós agaron aerób feltételek mellett kicsit lassú a növekedés 28 °C-on, de jó, a növekedés 37 °C-on lassabb és mérsékelttől a jóig terjed, 50 °C-on egyáltalán nincs növekedés. Szén-és nitrogén források hasznosítása Nitrogénforrásként ammónium-szulfátot tartalmazó só közeget használva a növekedés arabinózzal jó, xilózzal mérsékelt, dextrózzal, fruktózzal, mannózzal, ramnózzal, laktózzal, maltózzal, szacharózzal, raffinózzal, cellulózzal, inozitollal és mannitollal gyenge. Egyedüli szén és nitrogénforrásként N-acetil-etanolamin alkalmazható. Dextrózból vagy laktózból OF közegben (Difco Laboratories, Detroit, Michigan) aerób vagy anaerob körülmények között nem keletkezik sem sav, sem pedig gáz. Biokémiai reakciók A biokémiai reakciók a Manual of Microbiological Methods edited by the Society of American Bacteriologists Methods McGraw-Hill Book Co., New York, 1957 kézikönyvben szereplő standard módszereken alapszanak. kataláz — pozitív oxidáz - negatív a keményítő nem hidrolizál kazein nem hidrolizál zselatin nem cseppfolyósodik A lakmusz tej konzisztenciája nem változik, azonban gyengén lúgos lesz 7 nap múlva, indol — negatív kénhidrogén - negatív nitrátok nem redukálódnak ureáz — pozitív lizin és omitin dekarboxiláz — negatív Az N-acetil-tienamicin 890A] és 890A3 kifejezéseket a II képletű antibiotikum izomeijeire alkalmazzuk. A 890A1 és 890A3 leírása és eljárás előállításukra Patrick J. Cassidy, Edward O. Stapley, Robert T. Goegelman és Sebastian Hernandez 634,300 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban szerepel. Bejelentés napja: 1975. november 21. A 3 950 357 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás az antibiotikus hatású tienamicin előállítására vonatkozik eddig le nem írt Streptomyces species megfelelő fermentációs táptalajon történő tenyésztésével. A 4 000 161 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás megfelel a 7 514 165 sz. holland szabadalmi leírásnak és olyan fermentlevek és szennyezett oldatok tisztítására vonatkozik, amelyek tienamicint tartalmaznak és a tisztítás ioncserélő gyantán történik, ahol a gyanta poliakrilamid gél vagy adszorbensek pl. poliészter polimérek vagy polisztirol, hidrofob térhálós divinil benzol polimerek lehetnek. A találmány szerint előállított új antibiotikumok a dezacetil 890A i és dezacetil 890A3 az I képlettel jellemezhető vegyület izomeijei melyek a 890Ai és a 890A3 enzimes hidrolízisével, illetve a Protamino bacter genusába tartozó speciesben jelenlevő amidohidroláz felhasználásával állíthatók elő. A találmány szerinti eljárás abból áll, hogy a II képletű vegyület N-acetilcsoportját lehasítjuk oly módon, hogy a fenti vegyületet szoros érintkezésbe hozzuk az N-acetilcsoport hidrolizálására alkalmas amidohidrolázzal. Közelebbről a találmány szerinti eljárással az N-acetil-tienamicin 890Ai-t és 890A3-t amidohidrolázzal, azaz N-acetil-tienamicin-amidohidrolázzal hozzuk érintkezésbe és így N-dezacetilezzük. Az N-acetiletanolamin és az N-acetil-tienamicin között nem várt homológ kapcsolatot tapasztaltunk, minthogy az eddig le nem írt enzimmel az N-acetiletinolamin-amidohidrolázzal készített mikroorganizmus extraktumok sok esetben alkalmasak az N-acetil-tienamicin hidrolizálására. Ezenfelül azt találtuk, íogy az N-acetil-tienamicin hidrolizálására alkalmas amidohidrolázok hatásosnak bizonyultak a 890Ai és 890A » antibiotikumok új dezacetil formába való átalakítására is. A találmány továbbá kiterjed ezen mikroorganizmusok előállítására is, ahol az eljárás az N-acetiletanolamin segítségével növekedő törzsek kiválasztására szolgál, majd ezeket a mikroorganizmusokat az N-acetil-tienamicin amidohidroláz jelenléte szempontjából vizsgáljuk. Az N-acetil-tienamicin új N-dezacetilezésével kapott tienamicin hasznos antibiotikum. Leírása, előállítási módszerei és felhasználása megtalálhatók Jean S. Kahan, Frederick M. Kahan. Edward O. Stapley, Robert T. Goegelman és Sebastian Hernandez 3 950 357 lajstromszámú bejelentésében. Bejelentés napja: 1974. november 25. A dezacetil 890Ar és 890A 3 antibiotikumok új és hasznos antibiotikumok. A találmány tehát az N-acetil-tienamicin új dezacetilezésére is vonatkozik. Az N-acetil-tienamicint 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
