175265. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-tienamicin előállítására
IQ 175265 20 Teszt-eredmények ATCC 6538P aktivitás ATCC 8461 aktivitás (zóna mm) (zóna mm) 5 39/44 e 35/44 e e = elmosódott sávkontúr 10 200 ml fermentlét pH = 8 értékre állítunk és 10 ml Dowex 1 x 2 klorid-ciklusú gyantán 2 ml/min sebességgel adszorbeáltatjuk és a kifolyó folyadékot 10-szer 20 ml-es frakciókban szedjük. .Az adszorbeált anyagot 90%-os metanollal, 10% 15 vízzel, 3% ammónium-kloriddal v(v)w és az eluátumot 10x5 ml-es frakciókba gyűjtjük. Az 1 —6 eluátum-frakciókat összegyűjtjük és vákuumban koncentráljuk a metanol eltávolítása céljából. A koncentrátumot a lemez-diffúziós módszerrel elemez- 20 zük, l,27cm-es átmérőjű 100pl antibiotikum oldatot tartalmazó lemezt alkalmazunk, kontrollként pedig Staphylococcus aureus MB-2985 törzset használunk, 28 mm-es zónát kapunk. Az MB—2985 teszt-tenyészeteket a következő 25 módon állítjuk elő: Agy—szív infúziós közegben 37 °C-on rázással éjszaka növesztett MB—2985 tenyészetet 20 000- -szorosára hígítunk és egy 85 mm átmérőjű 10 ml 30 agy-szív infúzió agart tartalmazó Petri-csésze felszínére mossuk. A 100 pl antibiotikum oldatot tartalmazó l,27cm-es átmérőjű lemezeket a csészékre helyezzük, amelyeket ezután 18 órán át inkubálunk 37 °C-on. A gátlási zónákat mm-ben 35 olvassuk le. 2. példa 40 A Streptomyces cattleya NRRL 8057 liofllizált tenyészetét tartalmazó kémcsövet aszeptikusán felnyitjuk és a tartalmával egy 50 ml A táptalajt tartalmazó inokulum tenyészet előállítására szolgáló 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot beoltunk. Az A 45 táptalaj összetétele a következő: A táptalaj élesztő-autolízis termék 50 (Ardaminex) 10,0 g glükóz 10,0 g foszfát-puffer 2,0 ml magnézium-szulfát-heptahidrát 0,05 g desztillált víz 1000 ml xArdamine: Yeast Products Corporation A pH-t nátrium-hidroxiddal 6,5-re igazítjuk. Foszfát-puffer oldat kálíum-dihidrogén-foszfát 91,0 g dinátrium-hidrogén-foszfát 95,0 g desztillált víz 1000 ml Ezt a beoltott tenyészetet tartalmazó lombikot 28 °C-on 220 percenkénti fordulatszámú rázógéppel rázatjuk (5,08 cm-es löket) 2 napig, ennyi idő alatt a növekedés kielégítő. 15 db 250 ml-es Erlenmeyer lombikot, melyek mindegyike 40 ml B táptalajt tartalmaz, beoltunk a beoltott növekményt tartalmazó lombik 1 ml-ével. A B táptalaj összetétele a következő: kukoricaliszt 20,0 g desztillációs maradék 10,0 g szójababliszt 15,0 g nátrium-citrát 4,0 g kalcium-klorid-dihidrát 0,5 g magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 g kobalt-klorid-hexahidrát 0,01 g vas-szulfát-heptahidrát 0,01 g xxPolyglycol 2000 0,25 térfogat% desztillált víz 1000 ml pH: nátrium-hidroxiddal 6,5-re igazítjuk. xxPolyglycol 2000: Dow Chemical Co. A fenti 15 lombikot 28 °C-on 220 percenkénti fordulatszámú rázókészüléken rázzuk (5,08 cm-es löket) 3 napig. A kísérleteket standard Staphylococcus aureus ATCC 6538P és Vibrio percolans ATCC 8461 törzsekkel végezzük, a centrifugált fermentlé felülúszójába mártott 1,27 cm-es átmérőjű lemezeket használunk. Az elemezés előtt a fermentlé pH-ját a következő táblázat szerint állítjuk be. Kor (óra) 48 53 72 ATCC 6538P aktivitás 33/39e 31/38e 21/27e ATCC 8461 aktivitás 35gye/46e 36gye/44e 33gye/38e kezdeti pH 5,2 5,1 4,8 beállított pH 6,1 6,2 6,9 10 gye = gyengén elmosódott e = elmosódott
