175173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergot alkaloid-származékok előállítására
g 175173 10 Közegek pép 3 TM TG T 25 káliumklorid — _ _ 0,12 ferro szulfát *7H20 0,007 0,007 0,007 0,007 cinkszulfát’7 H20 0,00 6 0,006 0,006 0,006 pepton 10-agar ammóniumhid-20 18 — roxid— 5 ,2 pH-ig 5,2 pH-ig nátriumhidroxid — 5 a pH-ig —csapvíz — — 1000ml-re 1000 ml-re desztillált víz 1000 ml-re 1000 mire —sterilizáció 110C° x20 110C° x 20 110 C° x30 105 C° x25 perc perc perc perc 7. példa ATCC 15383 törzset, amely ergotamint termel, alámerített kultúrában, „TG” közegen (II. táblázat) 4 napig tenyésztettünk. A kultúrát steril körülmények között Büchner-tölcséren keresztül leszűrtük, vízzel mostuk, kis mennyiségű vízben szuszpendáltuk, majd homogenizáltuk. A homogenizált anyagot vízben szuszpendáltuk és UV lámpával (520 p watt/cm2 ) 60 másodpercig kezeltük. A kezelt szuszpenziót TM szilárd közegre (II- táblázat) vittük, 1% fenilalanint, 1% 1-leucint, 1% d-l-alanint adtunk hozzá. A kapott lapokat 28 C°-on 12 napig inkubáltuk. A megnövekedett kolóniákat ismétlő-térítő módszerrel TM szilárd közegre vittük Petri-csészékben és a lapokat 28 C°-on 12 napig inkubáltuk. A vizsgált 5000 kolóniából 2 fenilalanintól függő mutánsnak bizonyult. Ezen törzsek egyikét inokulumként használtuk, edényben történő fermentációhoz, az 1. példa szerinti körülmények között, mind a vegetatív, mind pedig a termelő fázisban. A termelő fázis 4. napján 4% p-klórfenilalanint adagoltunk. A táptalaj a 14. napon 1100/mcg/ml peptidalkaloidot eredményezett, amelynek 55%-a 5’-debenzü-5>-p-klórbenzilergotamin volt. Olvadáspont: 185-190C0 [a]i)0= -155° (kloroformban) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű ergot-alkaloidok és 9,10-dihidro-származékaik előállítására, ahol Rí metil- vagy izopropil-csoport, Ra 25 (a) képletű csoport, vagy helyettesítetlen 3-5 szénatomos egyenesláncú aUdl-csoport, Ra halogénatom, azzal jellemezve, hogy Claviceps purpurea mutáns 30 törzseket készítünk, ezeket függővé tesszük hidroxilcsoporttól mentes aminosavaktól, ezeket a mutáns törzseket kiválasztott aminosavak, mint prekurzorok jelenlétében a fermentációs táptalajhoz adjuk és a termelt ergot-alkaloidokat ismert módon elkülönítjük 35 a táptalajtól és kívánt esetben az (I) általános képletű ergot-alkaloidokat ugyancsak ismert módszerekkel hidrogénezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti fermentációs eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy hidroxil-40 csoporttól mentes aminosavként leucint vagy fenilalanint használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti fermentációs eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy Claviceps purpureaként Claviceps purpurea ATCC 15383-t, Ck-45 viceps purpurea ATCC 20103-t vagy Ckviceps purpurea ATCC 20019-t használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti fermentációs eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy aminosavakként legalább egy halogénatommal helyettesí-50 tett: fenilalanint, vagy 2-7 szénatomos egyenesláncú a-aminosavakat vagy halogénatommal helyettesített semleges aminosavakat alkalmazunk. 2 db rajz Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásán falai: Hinter Zoltán osztályvezető 70-OTH-80.119
