175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
7 175158 8 Hogy jó redukálóképességű tenyészetet kapjunk, ezenkívül arra is szükség van, hogy a fermentlét keverjük. Erre a célra előnyösen olyan keverőt használhatunk, amelynek fordulatszáma percenként 100-250 között változhat. A mikroorganizmus tenyészet általában 24—48 óra alatt éri el kielégítő fejlettségét. A redukálóképesség lényegileg a tenyésztés folyamán képződött sejtek mennyiségétől függ. Ha a sejteket a fermentlétől, például centrifugálással elválasztjuk, és a karminomicin redukálására használjuk, a keletkezett 32 999 FP jelű vegyület mennyisége közvetlen arányban van a reakcióközeg sejtkoncentrációjával, a sejtekben dús reakcióközegnek igen erős redukálóképessége van. A karminomicinnek 32 999 RP jelű vegyületté való redukcióját úgy hajtjuk végre, hogy a karminomicin, vagy valamely sója vizes oldatához olyan mikroorganizmus tenyészetet adunk, amely fejlődésének és redukálóképességének kedvező fokát elérte, vagy az ilyen tenyészetekből elkülönített sejteket vagy az ilyen sejtekből kapott enzimkivonatokat adjuk az oldathoz. A sejtekből enzimkivonatokat úgy kaphatunk, hogy a sejtfalakat kémiai vagy biokémiai úton vagy fizikai módszerekkel elroncsoljuk. A sejtfalak elroncsolását előnyösen a mikroorganizmus tenyészetből kiindulva vagy a tenyészetből elkülönített sejtek vízzel készült szuszpenziójából kiindulva végezzük, és a sejtfalakat oldani képes enzimmel, például lizozimmel kezeljük, vagy ultrahang hatásának tesszük ki. Az enzimkivonatot a tenyészközeg centrifugálása után a felülúszó folyadékban oldatként kapjuk. Az enzimkivonat oldatát általában közvetlenül használjuk fel anélkül, hogy a redukáló fázisban utólagos kezelést alkalmaznánk. A redukciót általában 23 és 37 °C között, előnyösen 26 és 30 °C között, keverés közben hajtjuk végre, és 1—4 napig tartó reagáltatás után a redukció teljessé válik. A redukció 5 és 10 közötti pH értékeknél megy végbe, de előnyös 7 és 8 közötti pH-nál dolgozni. A reakcióközeget például olyan keverőrendszerrel keverhetjük, amelynek fordulatszáma 100-250/perc. Jó kitermelést akkor érünk el, ha a redukáló közegben a karminomicin koncentrációja a redukció megkezdésekor előnyösen literenként 0,1 g és 1 g között van. B) A Streptomyces nemhez tartozó, például Streptomyces coeruleorubidus DS 8899 (NRRL 3046), Streptomyces coeruleorubidus DS 31 723 (NRRL 3045), Streptomyces coeruleorubidus DS 7126 (NRRL 8098) vagy Streptomyces bifurcus DS 23 219 (NRRL 3539) mikroorganizmusokat a Streptomyces fajok számára alkalmas táptalajon katalizátor, például ametopterin, szulfanilamid, szulfatiazol, szulfapiridazin, barbital, fenobarbital, butobarbital vagy pentiobarbital jelenlétében, aerób körülmények között tenyésztjük. A tenyésztés folyamán keletkezett 32 999 Rí jelű antibiotikum mennyisége a táptalaj összetéte létől, a hozzáadott katalizátor mennyiségétől és a hozzáadás időpontjától függően változhat, amint azt a következőkben látni foguk. A Streptomyces coeruleorubidus DS 8899 (NRRL 3046) és a Streptomyces coeruleorubidus DS 31 723 (NRRL 3045) mikroorganizmusokat az 1 380 810 számú francia szabadalmi leírás és a Streptomyces bifurcus DS 23 219 (NRRL 3539) mikroorganizmust az 1 593 235 számú francia szabadalmi leírás már ismertette. A Streptomyces coeruleorubidus DS 7126 új törzs, és egy talajmintából különítettük el. A mikroorganizmus egy mintáját a Peoriában (Illinois állam, Amerikai Egyesült Államok) levő Northern Regional Research Laboratory, Department of Agricultura intézetben letétbe helyeztük. Itt az NRRL 8098 deponálási számot kapta, és a köz számára ezen a számon hozzáférhető. A törzs izolálását általánosan használt módszerrel úgy hajtottuk végre, hogy kis mennyiségű földmintát steril, desztillált vízben szuszpendáltunk, és a szuszpenziónak mindegyik hígításából vett kis mennyiséget Petri-csészében levő agar táptalaj felületén szélesztettünk. Néhány napi, 26 aC-on való inkubálás után a mikroorganizmusok kifejlődtek, a tanulmányozni kívánt telepeket kiemeltük, és ferde agar lemezekre szúrással átoltottuk, hogy bőségesebb tenyészetet kapjunk. A Streptomyces DS 7126 a G. F. Gauze és munkatársai által leírt [Problems in the Classification of Antagonistic Actinomycètes - The American Institute of Biological Sciences, Washington, 100 (1959)] Streptomyces coeruleorubidus fajhoz tartozik, ennek legfontosabb jellemzőivel rendelkezik. Spórás légmicéliumának színe kék vagy világos zöldeskék, Gauze-féle I ásványi táptalajon vegetatív micélium fejlődik, amelynek színe vörösessé válik, és agarban diffundáló vöröses színű oldható pigmentet termel, mindezek a tulajdonságok a Streptomyces coeruleorubidus fajra jellemzőek. Ezért az új törzs elnevezése Streptomyces coeruleorubidus DS 7126. A Streptomyces coeruleorubidus DS 7126 gömb alakú vagy rövid, tojásdad alakú spórákat képez, ezek mérete 0,7—0,9 p. (0,8-1,1 p). Egyszerű vagy csoportos spóratartókat képez, a spóraláncok elég hosszúak, és több tucat csigamenetté kunkorodnak. A spóraláncok többé-kevésbé nyitott spirálisokat alkotnak, és a csigamenetek száma kettőtől 5- vagy 6-ig terjedhet. Spóraképzése alapján a Streptomyces coeruleorubidus DS 7126 a Pridham szerinti osztályozás Spira szekciójába sorolható. A Streptomyces coeruleorubidus DS 7126 25 o°C-on jól fejlődik, 37 °C-on kevésbé jól, és 50 °C-on egyáltalán nem fejlődik. 26 °C-on inkubált tenyészetei a következő biokémiai tulajdonságokat mutatják: melamintermelés : pozitív, kénhidrogéntermelés : pozitív, tirozináz reakció : pozitív, zselatin elfolyósítása pozitív, lassú, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
