175158. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacénszármazékok előállítására
27 175158 28 érjük el, ez az időtartam lényegileg az alkalmazott közegtől függ. Az előbb mondottak alapján érthető, hogy a 32 999 RP jelű vegyidet termelésére használt Streptomyees atroviolaceus DS 8398 mikroorganizmus tenyésztésének általános körülményei nagymértékben változhatnak, és minden egyes körülményhez szükség szerint kell alkalmazkodni. A 32 999 RP jelű vegyületet a fermentléből az ebbe a családba tartozó antibiotikumok elkülönítésére szokásosan használt eljárásokkal választhatjuk el. A 32 999 RP jelű vegyületet például a redukciós közegből vagy a fermentléből 9 körüli pH értéknél szerves oldószerrel, például kloroformmal, metilénkloriddal, n-butanollal vagy az ezeket az oldószereket alkalmas arányban tartalmazó keverékkel extrahálhatjuk. A fermentlét 1,5 és 9 közötti pH értéknél szűrést elősegítő adalék jelenlétében szűréssel is elválaszthatjuk. Ezt a műveletet előnyös savas közegben végrehajtani, különösen előnyösen oxálsavval 1,5—2 pH-ig savanyítjuk meg a fermentlét. 1—3 szénatomos alifás alkohol jelenlétében a szűrést 2 és 8 pH között szintén végre lehet hajtani. A szüredékből bepárlás után a 32 999 RP jelű vegyület szerves oldószerrel, például kloroformmal, metilénkloriddal, n-butanollal vagy az ezeket az oldószereket alkalmas arányban tartalmazó keverékekkel extrahálhatjuk. A szerves kivonatból egymásutáni mosás és extrahálás, majd a kivonatok kis térfogatra való bepárlása után a 32 999 RP jelű vegyületet lecsapással különíthetjük el, vagy a kivonathoz olyan oldószert, például hexánt adva, amelyben a vegyület gyakorlatilag oldhatatlan, a vegyületet az oldatból kicsapjuk. Adott esetben ezt a műveletet az antibiotikumnak sav, például sósav hozzáadásával savaddíciós sóvá való alakítása után végezzük. Adott esetben a 32 999 RP jelű vegyületet különféle szokásos tisztítási eljárásoknak vethetjük alá, például átkristályosítással vagy különféle adszorbenseken való kromatografálással tisztíthatjuk. A 32 999 RP jelű vegyület és nem toxikus, azaz farmakológiailag elfogadható sói különösen egerek átoltható daganatai, elsősorban L1210 leukémia, P 388 leukémia és leukoszarkomatózis esetében 0. 125 és 0,250 mg/kg közötti adagokban nagyon hatásosaknak bizonyultak. Farmakológiái vizsgálatok 1. Szubakut toxicitás Egyhónapos, 18-20 g-os nőstény egereknek intraperitoneálisan, intravénásán, perorálisan vagy szubkután 5 napon keresztül adtuk a találmány szerinti vegyületet. Az állatokat 21 napig megfigyelés alatt tartottuk, és az elpusztultak számát feljegyeztük. Ebből meghatároztuk azt az adagot, amely az egerek 50%-ának pusztulását okozza (LD50)- Egy adagot 5—6 patkányon vizsgáltunk, és a beadás módjától függően 4-5 adagot alkalmaztunk. 2. L 1210 leukémia elleni hatás Körülbelül egyhónapos, 18—22 g-os nőstény és hím patkányokat intraperitoneálisan megfertőztünk 1 ml, 103 L 1210 leukémiás sejtet tartalmazó szuszpenzióval. A vizsgálandó vegyületet intraperitoneálisan, naponta egy alkalommal 5 napon keresztül kapták, és az első beadás 1 órával a fertőzés után történt. Az állatokat elpusztulásukig megfigyelés alatt tartottuk. Mindennap feljegyeztük az elpusztult állatok számát (leukémiás egerek túlélési ideje 15—16 nap). A vegyület meghatározott adagjának hatékonyságát a következő képlettel számítottuk ki: kezelt állatok átlagos t túlélési ideje (nap) — 100 = ------------------------------------------------------------------------------------ • 100 T kezeletlen állatok átlagos túlélési ideje (nap) Végül meghatároztuk a terápiás indexet is, amely az 50%-os elhullást okozó adag (LD50) és a túlélést 50%-kal meghosszabbító adag (AD50) hányadosa. Az AD so adagon a kezeletlen állatokhoz képest a túlélési időt 50%-kal meghosszabbító adagot értjük, azaz a fenti képlet szerint t----- 100= 150. T Egy adag hatását 10 egéren vizsgáltuk és 2—4 különböző adagot használtunk. 3. Ehrlich féle ascites tumor elleni hatás A vizsgálatot egyhónapos, 18-22 g-os nőstény patkányokkal végeztük, amelyeket intraperitoneálisan 1 ml, 106 Ehrlich-féle sejtet tartalmazó szuszpenzióval fertőztünk meg. Adagonként 10 egeret használtunk. A kísérlet végrehajtását és az eredmények kiértékelését a leukémiás vizsgálatoknál leírtak szerint végeztük. Az eredményeket a következő táblázat szemlélteti. Félakut toxicitás (egér): LD50 szubkután 1,60 mg/kg LD50 intraperitoneálisan 0,30 mg/kg L 1210 leukémia elleni hatás: Adag Hatékonyság 0,50 163% 0,30 180% 0,15 184% ADi so = 0,11 0,07 128% 0,04 103% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
