175152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-oxi-savakat tartalmazó, gasztrin-hatású peptidek előállítására
3 175152 4 badalmi leírás. A leírt vegyületek hatása mind kisebb, mint a Peptavlon készítményé. Az a-(amino-oxi)-karbonsavat tartalmazó pép tidek számos fehérjebontó enzimmel szemben ellenilloak [L. Kisfaludy, M. Low, T. Dévényi: Acta Biochim. Biophys. Acad. Sei. Hung., 6., 393. (1971)]. Az aminovégen a-(amino-oxi)-karbonsavat tartalmazó ACTH-analógok nyújtott hatása például valószínűleg annak tulajdonítható, hogy az aminovégi a-(amino-oxi)-acil-csoport megvédi a molekulát az aminopeptidáz-típusú enzimek támadása ellen (167 655 számú magyar szabadalmi leírás). Azt találtuk, hogy az aminovégen amino-oxi-karbonsavat tartalmazó pentagasztrin-analógok igen hatásos vegyületek, különösen hatásosak az amino-oxi-acetil-, az a-L és -D-(amino-oxi)-propionil- és a íHamino-oxi)-propionil-származékok. Ezek hatása egyes származékoknál felülmúlja a Peptavlonét. A találmány értelmében úgy állítjuk elő az I általános képletű vegyületeket A-Trp-B-Asp-Phe-NH-Y (I) — ahol A, B és Y a fenti jelentésűek —, hogy valamely II általános képletű tetrapeptid-amidot H-Trp-B-Asp-Phe-NH-Y (I1) - ahol B és Y a fenti jelentésű — valamely A! X általános képletű amino-oxi-acil-származékkal reagáltatunk — ahol A] jelentése megegyezik A jelentésével, kivéve az amino-oxi-Ac-csoportot és X hidroxilcsoportot, halogénatomot, előnyösen klóratomot, pivaloil-oxi-csoportot, R—0- -C02-csoportot képvisel, ahol R jelentése rövidszénláncú alkilcsoport, előnyösen etil- vagy izobutilcsoport, X jelentése továbbá adott esetben nitrocsoporttal vagy egy vagy több halogénatommal helyettesített fenoxiesoport, előnyösen p-nitro-, 2,4,6-triklór-, 2,3,5-triklór-, pentaklór- vagy pentafluor-fenil-oxi-csoport, N-szukcinimid-oxi-csoport, és ha X helyén hidroxilcsoport áll, az acilezést előnyösen diciklohexil-karbodiimiddel végezzük, majd az A helyén amino-oxi-csoportot tartalmazó vegyületek előállítása esetén az A] csoportból a terc-butil-oxi-karbonil- illetőleg benzil-oxi-karbonil-védőcsoportot lehasítjuk és kívánt esetben a kapott vegyületet valamely gyógyászatilag elfogadható suvaddíciós sójává alakítjuk. Az Aj-X általános képletű reakcióképes vegyület előnyösen pivalinsawal vagy szénsavfélészterrel készített vegyes anhidrid vagy aktív észter lehet. Az utóbbiak közül különösen előnyösen alkalmazhatjuk a halogénezett fenilésztereket, elsősorban a pentaklór- és pentafluorfenilésztert. A kiindulási anyagként alkalmazott H—Trp—B-Asp -Phe—NH-Y általános képletű tetrapeptidamidot önmagában ismert módon fragmenskondenzációval vagy lépésenkénti lánchosszabbítással állíthatjuk elő azidos, vegyes anhidrides, diciklohexilkarbodiimides, aktív észteres vagy egyéb ismert aktiválási módszerrel. A reakcióban részt nem vevő funkciós csoportokat szükség esetén védjük, különösen hidrolízissel, acidolízissel vagy katalitikus hidrogenolízissel eltávolítható csoportokkal. A karboxilcsoportot például benzil-alkohollal, terc-butanollal vagy p-klór-benzil-alkohollal észterezve védhetjük. Az amino-oxi- és az aminocsoport védelmére formil-, tozil-, tritil-, trifluor-acetil-, o-nitro-szulfenil-, ftalil-, p-klór-benzil-oxi-karbonil-, de különösen benzil-oxi-karbonil- és terc-butil-oxi-karbonil-csoportot használhatunk. A triptofán indolvázának nitrogénatomja esetenként formilcsoporttal védhető. A védőcsoportok megfelelő kombinációjával el tudjuk érni, hogy ezek önmagukban ismert módszerek (például hidrolízis, acidolízis, katalitikus hidrogenolízis) segítségével szelektíven vagy egyidejűleg eltávolíthatók legyenek. Az eljárás egyik előnyös kiviteli módja szerint az aminovégi védett amino-oxi-acil-csoport beépítésére a pentahalogén-fenil-észteres eljárást használjuk, az aktív észtert reagáltatjuk a karboxilvégi H-Trp-B-Asp—Phe—NH-Y tetrapeptidamiddal. A H-Trp—B - Asp-Phe—NH2 szintéziséhez Z-Phe-OH-ból indulunk ki, és önmagában ismert módszerrel elkészítjük a Z-Phe-NHj-ot, majd az amino védőcsoport eltávolítása után lépésenként védett aminosav-( N-hidroxi-szukcinimid)-észterekkel vagy -(pentahalogén-fenil)-észterekkel építjük fel a karboxilvégi H—Trp—B—Asp—Phe—NH2 tetrapeptidamidot. A H-Trp-B Asp-Phe-NH-0-CH2-C02H szintézisekor H—Phe—OGly—OH-ból indulunk ki. A H—Phe-OGly—OH származékot előállíthatjuk úgy, hogy az amino-oxi-ecetsavat a Z—Phe—OH vegyes anhidridjével vagy aktív észterével acilezzük, majd a kapott vegyületről jégecetes hidrogén-bromiddal eltávolítjuk a védőcsoportot. A fentiekben leírt két szintézis során kiindulhatunk BOC-Phe-OH-ból is. A BOC-Phe-NH2-ről és a BOC—Phe—OGly—OH-ról a BOC-csoport enyhébb savas kezeléssel távolítható el. Az aszparaginsav -/3-karboxilcsoportját védő észterkötést idipeptid-, tripeptid- vagy tetrapeptidfázisban hasíthatjuk szelektíven vagy az aminovédő csoporttal együtt acidolízissel vagy, ha Y jelentése hidrogénatomtól különbözik, katalitikus hidrogenolízissel. A végtermék tiszítása egyszerű kémiai kristályosítással, átcsapással, szilikagéles oszlopkromatr gráfiával vagy karboxi-metil-cellulózos ioncserélő kromatográfiával végezhető el. Az új vegyületeket az előállítás során alkalmazott módszertől függően szabad savak vág}' sók formájában kapjuk. A szerves vagy szervetlen savakkal alkotott sókat önmagukban ismert módszerekkel, vagy a tisztítási eljárás során belső sóvá alakíthatjuk. A találmány szerinti új pentagasztrin analógok gyomorsavtermelést fokozó hatását Ghosh és Schild, [Br. J. Pharmac. Chemoth. 13., 54. (1958)] valamint Lai módszerével [Gut., 5., 327. (1964)] vizsgáltuk, figyelembe véve Pissidis és Clark módosítását [Gut. 8., 196. (1967)]. Az állatkísérletek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
