175050. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás neomycin előállítására
7 175050 Szójaliszt 5,0% Keményítő (kukorica fmomítvány formájában) 6,0% (CaCCb) Kalciumkarbonát 0,25% Burgonyacukor 1,5% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% Szójaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 6,52 Sterilizálás: 120°C-on, 70 percig. pH sterilizálás után: 6,40—7,00. A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot a tápfolyadék mennyiségére számolt 10% előfermentációval oltottuk be, 60 m3 lóra levegőztetéssel, a pH = 6,90 érték eléréséig 1 atm, majd 0,4 atm belső nyomás tartásával, a fermentáció első 40 órájában 32 °C-on, majd 34 °C-on végig, 2,6 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett 136 órán át végeztük. A fermentáció 136. órájában hatóanyagtartalma 5890 gamma/ml volt. A fermentlé szűrletéből (Varion KCO típusú ioncserélő gyanta alkalmazásával) a 169 452 számú magyar szabadalom szerinti eljárással 1 m3-re vonatkoztatva 3445 g tiszta neomycin-szulfát hatóanyagot nyertünk ki. 3. példa A 00165 sz. alatt deponált törzsből 200 cm2 felületű szilárd táptalajon spóraszuszpenziót állítottunk elő oly módon, hogy a beoltott táptalajt 28 °C-on, 168 órán át inkubáltuk. A táptalaj összetétele a következő volt: Szacharóz 3,0% (NaNOí) Nátriumnitrát 0,2% (KH2P04) Káliumdihidrogénfoszfát 0,1% (MgSCh ) Magnéziumszulfát 7H20 0,05% (FeS04) Vas(II)-szulfát 7H20 0,001% (KC1) Káliumklorid 0,05% agar-agar pH sterilizálás előtt: 7,00 Sterilizálás: 120°C-on, 30 percig. pH sterilizálás után: 6,80. 3,0% Az inokulum fermentációs táptalaj vplt: a következő Burgonyakeményítő 2,5% Kukoricalekvár (50%-os) 5,0% [(NH* )í S04 ] Ammóniumszulfát 0,5% (CaCOí) Kalciumkarbonát 0,8% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% (KHjP04) Káliumdihidrogénfoszfát 0,03-0,04% Pálmaolaj pH sterilizálás előtt: 7,00-7,20 Sterilizálás: 125°C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,80-7,20. 0,5% A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot 5,3 x 10® számú spórával oltottuk be, majd 0,4 atm belső nyomás alkalmazásával, 60 m3 /óra levegő átáramoltatás mellett, 32 °C-on, 2,2 kW/m3 bekevert energia alkalmazásával 25 órán át fermentáltuk. C A fermentációs táptalaj összetétele volt: a következő Szójaliszt Keményítő (kukorica fino-5,0% mítvány formájában) 4,0% (CaCOa) Kalciumkarbonát 0,25% Burgonyacukor 2,77% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% Szójaolaj pH sterilizálás előtt: 6,40 Sterilizálás: 120°C-on, 70 percig. pH sterilizálás után: 6,00-7,20. 0,5% A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot a tápfolyadék mennyiségére számolt 10% inokulum fermentációval oltottuk be, 60 m3/óra levegőztetéssel, pH = 6,90 érték eléréséig 1 atm, majd 0,4 atm belső nyomás tartásával, a fermentáció első 40 órájában 32 °C-on, majd 34 °C-on végig, 2,6 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett 136 órán át végeztük. A fermentáció 136. órájában hatóanyagtartalma 12 300 gamma/ml volt. A fermentlé szűrletéből (Varion KCO típusú ioncserélő gyanta alkalmazásával) a 169 452 számú magyar szabadalom szerinti eljárással 1 m3-re vonatkoztatva 5965 g tiszta neomycin-szulfát hatóanyagot nyertünk ki. 4. példa Az LN—47 jelzésű, 00165 sz. alatt deponált törzsből 200 cm2 felületű szilárd táptalajon spóraszuszpenziót állítottunk elő oly módon, hogy a beoltott táptalajt 28 °C-on, 168 órán át inkubáltuk. A táptalaj összetétele a következő volt: Szacharóz 3,0% (NaN03) Nátriumnitrát 0,2% (KH2P04) Káliumdihidrogénfoszfát 0,1% (MgS04) Magnéziumszulfát 7H20 0,05% (FeS04 ) Vas(II)-szulfát 7H20 0,001% (KC1) Káliumklorid 0,05% agar-agar pH sterilizálás előtt: 7,00 Sterilizálás: 120°C-on, 30 percig. pH sterilizálás után: 6,80. 3,0% Az inokulum fermentációs táptalaj következő volt: összetétele a Burgonyakeményítő 2,5% Kukoricalekvár (50%-os) 5,0% [(NH4 )2 S04 ] Ammóniumszulfát 0,5% (CaCC>3) Kalciumkarbonát 0,8% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% (KH2P04) Káliumdihidrogénfoszfát 0,03-0,04% Pálmaolaj pH sterilizálás előtt: 7,00-7,20 Sterilizálás: 125°C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,80-7,20. 0,5% A 32°C-ra hűtött tápfolyadékot 5,2 x 10* számú spórával oltottuk be, majd 0,4 atm belső nyo-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
